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Dissertação

Identification of genetic determinants involved in multicellular aggregation in Burkholderia multivorans EVALUATED

Detalhes: Os microrganismos podem viver como células livres ou formando agregados. Esses agregados multicelulares são de grande importância, especialmente em ambientes clínicos, devido à maior capacidade de prevalecerem em diversas condições ambientais. Muitas bactérias do complexo Burkholderia cepacia são capazes de formar agregados, permitindo-lhes estabelecer infeções crónicas em pacientes com de fibrose quística (FQ), levando muitas vezes à diminuição da função pulmonar. No entanto, os mecanismos moleculares envolvidos na formação destes agregados são praticamente desconhecidos. Neste trabalho, caracterizaram-se dois isolados sequenciais de Burkholderia multivorans obtidos de um paciente com FQ, nos quais P0426-1 forma agregados e P0426-2, não. A comparação da sequência do genoma identificou 4 mutações pontuais em regiões codificantes, 2 indels e uma grande deleção em P0426-2. Uma das mutações é num gene que codifica a lactonase YtnP. Este tipo de enzimas é conhecida por regular a comunicação por quorum sensing através da degradação de N-acil-homoserina lactonas (AHLs). A expressão de YtnP-85R do isolado P0426-2 no isolado P0426-1 diminuiu a biomassa dos agregados e afetou a sua estrutura. A expressão de YtnP-85R em duas outras estirpes de B. multivorans formadoras de agregados, P0213-1 e P0148-1, causou alterações na estrutura dos agregados em P0213-1, mas não em P0148-1. Para determinar a variedade de AHLs possivelmente degradados por esta lactonase, a proteína recombinante His6YtnP-85S foi produzida e purificada com sucesso em E. coli, mas não se determinou a atividade enzimática. No futuro dever-se-à caracterizar esta nova lactonase, nomeadamente o seu envolvimento na regulação da expressão génica e patogénese em Burkholderia.
Keywords: Burkholderia multivorans, Agregados celulares, Lactonase, Fibrose quística

Discussão: novembro 25, 2021, 14:0