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Dissertação

Development of a strategy for the affinity magnetic fishing of the lectin Concanavalin Brasiliensis EVALUATED

Detalhes: Este trabalho apresenta um novo método de purificação da lectina Concanavalina Brasiliensis (ConBr) por fishing magnético por afinidade. Foram sintetizadas nanopartículas magnéticas (MNPs) revestidas com Goma-arábica (GA) ou Dextrano. Foram consideradas as seguintes MNPs: MNPs revestidas com GA (MNPGA), com Dextrano (MNPDex), com GA e aminadas (MNPGA_NH2), com Dextrano e aminadas (MNPDex_NH2), com GA e manose (MNPGA_Man), com Dextrano e manose (MNPDex_Man). O revestimento das MNPs com GA e Dextrano foi confirmado por Espectroscopia de infravermelho por transformada de Fourier (FTIR). A extensão da aminação das MNPs foi avaliada pelo teste colorimétrico de Kaiser. As MNPs foram também caracterizadas por Difusão Dinâmica de Luz (DLS) e Microscopia Electrónica de Transmissão (TEM) de forma a estudar o raio hidrodinâmico, o potencial zeta e o tamanho e morfologia do núcleo de ferro, respectivamente. A ligação de todas as MNPs supracitadas à proteína ConBr foi testada na presença dos iões Ca2+ e Mn2+, cuja existência é essencial para a ligação a hidratos de carbono. Foram ajustadas isotérmicas de Langmuir, resultando em capacidades máximas de ligação distintas. As partículas revestidas com Dextrano apresentaram os valores mais elevados de ligação à ConBr (até 183.51 mg/g) tendo sido seleccionadas para prosseguir os estudos. O efeito do pH, sal, agentes quelantes e competidores nos tampões de eluição foi avaliado para a recuperação de ConBr (de amostras purificadas e impuras) após a ligação às MNPs. Conduziram-se testes preliminares utilizando o extracto da semente procurando determinar se MNPs seriam capazes de selectivamente ligar a ConBr e subsequentemente purificá-la.
Keywords: partículas magnéticas, goma-arábica, dextrano, Concanavalina brasiliensis, purificação

Discussão: novembro 16, 2010, 9:30

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