Dissertação

Integrated expansion and cardiac differentiation of human induced pluripotent stem cells in 2D and 3D conditions EVALUATED

As células estaminais pluripotentes, mais concretamente as células estaminais humanas pluripotentes induzidas (hiPSC) podem ser usadas para a criação de plataformas para modular doenças, testar fármacos ou até para medicina regenerativa. Todavia para ser possível alcançar estas aplicações é imperativo estabelecer um sistema fidedigno para a expansão e a diferenciação de hiPSC. Uma área de interesse é a da diferenciação cardiovascular, devido à grande taxa de morbilidade e mortalidade associada às doenças cardiovasculares. O objetivo deste trabalho foi a expansão e diferenciação de hiPSC em cardiomiócitos, em 2D (sob forma de monocamada) e 3D (através de agregados em suspensão), usando novos meios de cultura e de diferenciação. Posteriormente à expansão, obteve-se um valor máximo de 99.6% de OCT4, em 2D e de 97.6%, em 3D. hiPSC foram diferenciadas em cardiomiócitos através da modulação temporal da via de sinalização Wnt canónica. As células diferenciadas em monocamada demonstraram contração espontânea a partir do dia 8 e as células diferenciadas em agregados a partir do dia 7 de diferenciação, A expressão de um marcador de pluripotência (Nanog) diminuiu progressivamente ao longo do tempo, enquanto que a do marcador cardíaco (TNNT2) aumentou. As análises de citometria de fluxo, realizadas no dia 12 de diferenciação revelaram um máximo de 42.2% de cTnT para a diferenciação em monocamada e 78.2% para a diferenciação em agregados. Apesar de ser necessário aplicar algumas otimizações ao protocolo, os resultados obtidos sugerem que este pode ser utilizado para a expansão e posterior diferenciação de hiPSC em cardiomiócitos.
células estaminais pluripotentes induzidas, expansão, diferenciação cardíaca, cardiomiócitos

Novembro 23, 2017, 11:0

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

ORIENTADOR

Tiago Paulo Gonçalves Fernandes

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar

ORIENTADOR

Maria Margarida Fonseca Rodrigues Diogo

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar