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Dissertação

Integrated expansion and cardiac differentiation of human induced pluripotent stem cells in 2D and 3D conditions EVALUATED

Detalhes: As células estaminais pluripotentes, mais concretamente as células estaminais humanas pluripotentes induzidas (hiPSC) podem ser usadas para a criação de plataformas para modular doenças, testar fármacos ou até para medicina regenerativa. Todavia para ser possível alcançar estas aplicações é imperativo estabelecer um sistema fidedigno para a expansão e a diferenciação de hiPSC. Uma área de interesse é a da diferenciação cardiovascular, devido à grande taxa de morbilidade e mortalidade associada às doenças cardiovasculares. O objetivo deste trabalho foi a expansão e diferenciação de hiPSC em cardiomiócitos, em 2D (sob forma de monocamada) e 3D (através de agregados em suspensão), usando novos meios de cultura e de diferenciação. Posteriormente à expansão, obteve-se um valor máximo de 99.6% de OCT4, em 2D e de 97.6%, em 3D. hiPSC foram diferenciadas em cardiomiócitos através da modulação temporal da via de sinalização Wnt canónica. As células diferenciadas em monocamada demonstraram contração espontânea a partir do dia 8 e as células diferenciadas em agregados a partir do dia 7 de diferenciação, A expressão de um marcador de pluripotência (Nanog) diminuiu progressivamente ao longo do tempo, enquanto que a do marcador cardíaco (TNNT2) aumentou. As análises de citometria de fluxo, realizadas no dia 12 de diferenciação revelaram um máximo de 42.2% de cTnT para a diferenciação em monocamada e 78.2% para a diferenciação em agregados. Apesar de ser necessário aplicar algumas otimizações ao protocolo, os resultados obtidos sugerem que este pode ser utilizado para a expansão e posterior diferenciação de hiPSC em cardiomiócitos.
Keywords: células estaminais pluripotentes induzidas, expansão, diferenciação cardíaca, cardiomiócitos

Discussão: novembro 23, 2017, 11:0