Dissertação

Detection of Dengue vírus using optomagnetic detection technology and centrifugal microfluidics EVALUATED

O vírus de Dengue e Zika são uma preocupação de saúde pública. Nos últimos 50 anos, incidência aumentou 30 vezes, estimando-se que entre 50-100 milhões de infecções aparecem anualmente. Estes vírus são transmitidos por mosquitos Aedes, encontrados em países tropicais/subtropicais. Estas regiões são pobres em recursos e as condições para diagnóstico e prevenção estão em defeito. Portanto, há grande demanda por tecnologias custo-eficientes sensíveis para point-of-care biossensores. Loop-mediated isothermal amplification é uma poderosa técnica de amplificação molecular, específica para uma sequência de ADN/ARN. É aqui demonstrado a integração deste método com tecnologia de biossensores optomagnéticos, incorporada em uma abordagem state-of-the-art para manipulação de fluidos em uma plataforma microfluídica centrífuga. A colaboração entre Denmark Technical University e Blusense Diagnostics, uma start-up biotecnológica , permitiu o desenvolvimento de protocolos optimizados para a detecção de vírus usando uma avaliação "end-point" e uma "real-time" monitorização da reacção. Mostra-se que após 30 minutos, o ensaio "end-point" permite detecção de 100aM Dengue-2 sintético, correspondente a 6000 moléculas de ADN, em 30μL volume total de reacção. Na abordagem "real-time" implementada, após 20 minutos de reacção é possível detectar 300aM de ADN Dengue-2, em 100μL de mistura. A detecção de amostras virais de ARN é validado, que, juntamente com um design microfluídico para separação de amostra, abre o caminho para incorporar totalmente extracção genómica, preparação de amostras, reacção e detecção para diferenciação de vírus em um sistema de baixo-custo miniaturizado e multifuncional.
Vírus de Dengue, Diagnóstico Point-of-Care, Loop-mediated Isothermal Amplification, Nanopartículas Magnéticas, Microfluídica Centrífuga

Novembro 25, 2016, 16:0

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

ORIENTADOR

João Pedro Estrela Rodrigues Conde

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Catedrático

ORIENTADOR

Marco Donolato

Blusense Diagnostics

Doutor