Dissertação

Rett Syndrome Modeling from Human Induced Pluripotent Stem Cells Using a Monolayer Culture System EVALUATED

As células estaminais pluripotentes induzidas (iPSCs) têm sido associadas a um enorme potencial desde a sua descoberta. Desde então, tentativas têm sido feitas para melhorar a segurança e a eficiência do método de reprogramação. As iPSCs representam um papel importante no desenvolvimento de novos fármacos e na modelação de doenças e, assim, surge a necessidade de optimização de métodos de cultura para a diferenciação destas células, para revolucionar tratamentos mas também para melhor se compreenderem doenças do desenvolvimento, como o síndrome de Rett. Nesta tese de mestrado, foi desenvolvida uma abordagem que reproduz a neurogénese e a gliogénese in vitro a partir de hiPSC, e permite obter neurónios maturos, usando o método de inibição dual-SMAD, num sistema de cultura aderente e bem definido. As células foram expandidas em VitronectinaTM usando o meio mTeSRTM1, e a diferenciação neural foi alcançada utilizando N2B27 suplementado com duas moléculas: SB-431542 e LDN-193189. Assim, foi possível obter neurónios maturos, usando três linhas celulares: duas provenientes de dadores saudáveis e uma com a mutação MeCP2, característica do síndrome de Rett. Foi posteriormente possível comparar os seus comportamentos durante a expansão e a diferenciação neural. As células mutadas apresentaram o mesmo comportamento que as células sem mutação durante a expansão – o mesmo nível de proliferação e manutenção da pluripotência. Todavia, durante a diferenciação, estas células apresentaram alterações, como menos projecções neurais e células positivas para TUJ1 e MAP2, concluindo-se que as células mutadas apresentam um menor número de neurónios maturos e uma menor complexidade dendrítica.
Células estaminais pluripotentes induzidas, síndrome de Rett, inibição dual-SMAD, indução neural

Novembro 25, 2014, 10:0

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

CO-ORIENTADOR

Tiago Paulo Gonçalves Fernandes

IBB - Instituto Superior Técnico

Doutor

ORIENTADOR

Maria Margarida Fonseca Rodrigues Diogo

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar