Dissertação

Design and production of silica and ORMOSIL nanoparticles for gene delivery EVALUATED

A nanomedicina é uma nova área resultante da combinação da nanotecnologia e medicina. Um dos objectivos de investigação em nanobiotecnologia é desenvolver e aplicar vectores não-virais em terapia genética. Os plasmídeos (pDNA) são amplamente utilizados em investigação como vectores não-virais para a entrega de genes. No entanto, são bastante ineficientes como mediadores da expressão genética, quando comparados com os vectores virais, por serem facilmente degradados. Assim, é importante que sejam desenvolvidos sistemas de transporte que os protejam e possibilitem uma eficiente entrega de genes. Nanopartículas (NPs) de sílica ou sílica organicamente modificada (ORMOSIL), são uma forte promessa no sentido de poderem vir a ser usadas como transportadores de genes, uma vez que apresentam uma série de características consideradas atractivas. Neste trabalho, foram sintetizadas NPs de sílica e ORMOSIL através do método modificado de Stöber e por um novo método baseado em LaMer. As NPs foram caracterizadas por técnicas de dispersão de luz, potencial zeta e microscopia eletrónica de transmissão. A complexação foi realizada com o DNA plasmídico, pVAX1-GFP, e analisada pela mobilidade electroforética deste em gel de agarose. Os estudos de transfecção foram realizados com células de ovário de hamster chinês e a sua eficiência avaliada por imagens de confocal e citometria de fluxo. Embriões de peixe zebra, foram utilizados para avaliar a citotoxicidade, biodistribuição e eficiência na expressão da proteína de fluorescência verde. As NPs sintetizadas apresentaram um tamanho e forma satisfatória para aplicação pretendida. Estas complexaram eficientemente com pDNA e não demonstraram qualquer efeito nocivo em organismos vivos.
Sílica, Sol-gel, Terapia genética, Vectores não virais, Transfecção, Toxicidade.

Julho 1, 2014, 11:0

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

CO-ORIENTADOR

Gabriel António Amaro Monteiro

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar

ORIENTADOR

Maria Clara Henriques Baptista Gonçalves

Departamento de Engenharia Química (DEQ)

Professor Auxiliar