Dissertação

Genetic engineering of synovial-derived mesenchymal stem cells for cartilage regeneration EVALUATED

A cartilagem articular é frequentemente danificada como resultado de lesões ou doenças degenerativas como a osteoartrite e artrite reumatóide. A sua limitada capacidade de auto-regeneração juntamente com a incapacidade das metodologias actuais em originar tecido cartilaginoso semelhante ao nativo motivou o interesse por terapias usando células estaminais. As células estaminais derivadas da membrana sinovial (SMSC) constituem uma abordagem prometedora para a regeneração da cartilagem, principalmente devido à sua maior capacidade de proliferação e superioridade para condrogénese. O papel da BMP4 como estimulador condrogénico foi comprovado in-vitro and in-vivo. Portanto, a modificação genética de SMSC usando vectores não virais para promover uma expressão transiente de BMP4 poderá aumentar a sua capacidade condrogénica, sem afectar a viabilidade e proliferação celular. Minicírculos (vectores de DNA desprovidos de sequências bacterianas) e plasmídeos contendo o gene BMP4 foram produzidos e purificados para posterior lipofecção em SMSC. Foi quantificada uma pureza de ≈88% para os minicírculos produzidos, o que afectou a eficiência de transfecção. As SMSC foram também transfectadas com vectores codificando para GFP, verificando-se que estas mantiveram a expressão de GFP durante mais de uma semana, com eficiências de transfecção de ≈30% viabilidades superiores a 90%. Além disso, SMSC expressando BMP4 cultivadas como pellets ou como agregados celulares utilizando o protocolo de Hanging Drop, originaram condrócitos normais. Em suma, a manipulação genética de SMSC de um modo transiente através do uso de métodos não-virais, provou ser uma estratégia promissora para futuras aplicações clínicas no âmbito da regeneração da cartilagem.
SMSC, Terapia génica não-viral, BMP4, Lipofecção, Minicírculos vs. DNA plasmídico, Regeneração da cartilagem

Dezembro 12, 2013, 18:0

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

CO-ORIENTADOR

Joaquim Manuel Sampaio Cabral

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Catedrático

ORIENTADOR

Teresa Catarina Páscoa Madeira

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Doutora