Dissertação

Purification of Human Induced Pluripotent Stem Cell-Derived Cells for Regenerative Medicine Applications EVALUATED

Células humanas pluripotentes induzidas (hiPSCs) são uma promissora fonte de células para aplicações clínicas, tais como transplantes de órgãos e tecidos construídos in vitro, devido à sua capacidade para se renovarem e para serem diferenciadas em células das três camadas germinais embrionárias. Aqui apresentam-se os resultados depois de diferenciar hiPSCs em progenitores neurais (NPs), com 80 % de eficiência, por meio do protocolo de diferenciação que inibe a via de sinalização SMAD, confirmando a robusteza deste método que usa duas moléculas de baixo peso molecular (SB431542, LDN193189) para gerar entidades neurais Pax6 e Nestin-positivas. Um dos maiores problemas, relacionados com a geração in vitro de populações derivadas de PSCs, é o potencial tumorogénico das células que não são capazes de se diferenciar. Estas PSCs, que permanecem nas culturas, têm o potencial para gerar teratomas, depois de transplantadas, e podem interferir com o resultado do protocolo de diferenciação in vitro. Uma estratégia para superar este problema consiste em eliminar as células pluripotentes, que “contaminam” as culturas, durante o processo de diferenciação. Neste contexto, a primeira estratégia de separação celular testada foi a cromatografia por afinidade com colunas de criogéis monolíticos. Contudo, esta abordagem foi muito desafiante porque as colunas cromatográficas avaliadas não apresentavam um tamanho e uma interconectividade dos poros adequados. Numa segunda abordagem, as células Tra-1-60 positivas foram descartadas por separação celular activada por magnetismo (MACS), que apresentou uma eficiência de purificação de aproximadamente 80 %, deixando as populações purificadas com apenas 1 a 5 % de células Tra-1-60 positivas.
Células estaminais pluripotentes induzidas, indução neural, separação celular, separação celular activada por magnetismo, cromatografia por afinidade

Outubro 30, 2012, 14:30

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

CO-ORIENTADOR

Maria Margarida Fonseca Rodrigues Diogo

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Equip.Prof.Auxiliar Convidado

ORIENTADOR

Joaquim Manuel Sampaio Cabral

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Catedrático