Dissertação

Development of tools to study human hair follicle biology in vitro - focus on hair follicle stem cells and their potential application in Vitiligo therapy EVALUATED

O estudo da dinâmica do folículo piloso (FP) é um tema chave na procura de tratamentos eficazes para doenças de pele, como Vitiligo. Particularmente, o ciclo do FP e as células estaminais da pele constituem uma área de interesse pois estas células têm um papel fundamental nesse evento. A maioria dos estudos nesta área foram realizados em animais, logo os seus resultados não podem ser diretamente transpostos para a espécie humana. A presente dissertação tem como objetivo contribuir para o aumento de conhecimento nesta área, através do desenvolvimento de ferramentas para estudar a biologia do FP humano. Nomeadamente, foi desenvolvida com sucesso uma ferramenta para quantificação do ciclo celular através de microscopia, usando células HCT-116 expostas a 5-Ethynyl-2’-deoxyuridine (EdU), cujo sinal foi medido através do software CellProfiler. Estimaram-se durações de 6/7h, 4/5h e 4/5h para as fases S, G1 e G2 respetivamente. Além disso, foi desenvolvido um método para analisar as dinâmicas do FP humano, onde as células EdU positivas foram quantificadas em diversas regiões. Como era esperado, a região do bulbo apresentou o maior numero de células EdU positivas, apesar de também se ter documentado replicação na bainha externa. Por fim, o isolamento das células estaminais foi iniciado. O protocolo para a obtenção da suspensão de células do FP foi estabelecido após um processo de otimização, concluindo-se que o meio de cultura mais adequado é o CnT-07. As ferramentas desenvolvidas nesta dissertação poderão ser usadas no futuro para implementar terapias celulares eficazes em pacientes com Vitiligo.
Células estaminais da pele, Ciclo celular, Folículo piloso, Proliferação, Microscopia

Dezembro 11, 2017, 9:0

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

ORIENTADOR

João António Augusto Ferreira

Faculdade de Medicina da Universidade de Lisboa

Professor Associado

ORIENTADOR

Cláudia Alexandra Martins Lobato da Silva

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar