Dissertação
Development of tools to study human hair follicle biology in vitro - focus on hair follicle stem cells and their potential application in Vitiligo therapy EVALUATED
O estudo da dinâmica do folículo piloso (FP) é um tema chave na procura de tratamentos eficazes para doenças de pele, como Vitiligo. Particularmente, o ciclo do FP e as células estaminais da pele constituem uma área de interesse pois estas células têm um papel fundamental nesse evento. A maioria dos estudos nesta área foram realizados em animais, logo os seus resultados não podem ser diretamente transpostos para a espécie humana. A presente dissertação tem como objetivo contribuir para o aumento de conhecimento nesta área, através do desenvolvimento de ferramentas para estudar a biologia do FP humano. Nomeadamente, foi desenvolvida com sucesso uma ferramenta para quantificação do ciclo celular através de microscopia, usando células HCT-116 expostas a 5-Ethynyl-2’-deoxyuridine (EdU), cujo sinal foi medido através do software CellProfiler. Estimaram-se durações de 6/7h, 4/5h e 4/5h para as fases S, G1 e G2 respetivamente. Além disso, foi desenvolvido um método para analisar as dinâmicas do FP humano, onde as células EdU positivas foram quantificadas em diversas regiões. Como era esperado, a região do bulbo apresentou o maior numero de células EdU positivas, apesar de também se ter documentado replicação na bainha externa. Por fim, o isolamento das células estaminais foi iniciado. O protocolo para a obtenção da suspensão de células do FP foi estabelecido após um processo de otimização, concluindo-se que o meio de cultura mais adequado é o CnT-07. As ferramentas desenvolvidas nesta dissertação poderão ser usadas no futuro para implementar terapias celulares eficazes em pacientes com Vitiligo.
dezembro 11, 2017, 9:0
Publicação
Obra sujeita a Direitos de Autor
Orientação
ORIENTADOR
Faculdade de Medicina da Universidade de Lisboa
Professor Associado
ORIENTADOR
Cláudia Alexandra Martins Lobato da Silva
Departamento de Bioengenharia (DBE)
Professor Auxiliar