Dissertação

Characterization and specific isolation strategies of prostate cancer exosomes: Preliminary work for the establishment of an integrated microfluidic platform for exosome isolation and analysis EVALUATED

Os exossomas são vesículas lipídicas secretadas por células que representam o seu tecido de origem, ao expressar marcadores de superfície e por terem conteúdo proteico e de ácidos nucleicos semelhantes à célula-mãe. Devido a esta correlação, à alta disponibilidade e acessibilidade em fluidos corporais, os exossomas são uma grande promessa no ramo de Diagnósticos. Analisá-los é no entanto complexo devido ao tamanho e resolução dos métodos usualmente usados, que por sua vez são pouco automatizados e demorados. Antes do desenvolvimento do dispositivo de microfluídica no Instituto Fraunhofer de Leipzig, para diagnóstico do cancro da próstata, os exossomas de linhas celulares deste cancro, LNCaP e PC-3, são caracterizados. A expressão proteica foi avaliada por anticorpos secundários fluorescentes anti-PSMA (sigla em inglês, Antigénio de Membrana Específico da Próstata) e por exossomas fluorescentes para experiências de captura específica. Estas experiências foram efectuadas num aparelho tipo FACS, o iQUE screener, medindo exossomas conjugados com contas de látex, e exossomas livres em lâminas de vidro activadas com grupos carboxilo ou em tiras de teste por fluxo lateral. A morfologia das vesículas foi confirmada por SEM (sigla em inglês, microscopia electrónica por varrimento). O método do iQUE foi optimizado em termos de duração de centrifugação, tubos, concentração das contas de látex e soluções de bloqueio para os anticorpos. Já os protocolos de captura específica requerem mais optimizações, especialmente com soluções de bloqueio válidas para vesículas.
cancro da próstata, exossomas, isolamento, microfluídica, PSMA, vesículas extracelulares

Novembro 21, 2016, 9:30

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

ORIENTADOR

Susann Allelein

Fraunhofer IZI Leipzig

Especialista

ORIENTADOR

Susana Isabel Pinheiro Cardoso de Freitas

Departamento de Física (DF)

Professor Associado