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Dissertação

Characterization and specific isolation strategies of prostate cancer exosomes: Preliminary work for the establishment of an integrated microfluidic platform for exosome isolation and analysis EVALUATED

Detalhes: Os exossomas são vesículas lipídicas secretadas por células que representam o seu tecido de origem, ao expressar marcadores de superfície e por terem conteúdo proteico e de ácidos nucleicos semelhantes à célula-mãe. Devido a esta correlação, à alta disponibilidade e acessibilidade em fluidos corporais, os exossomas são uma grande promessa no ramo de Diagnósticos. Analisá-los é no entanto complexo devido ao tamanho e resolução dos métodos usualmente usados, que por sua vez são pouco automatizados e demorados. Antes do desenvolvimento do dispositivo de microfluídica no Instituto Fraunhofer de Leipzig, para diagnóstico do cancro da próstata, os exossomas de linhas celulares deste cancro, LNCaP e PC-3, são caracterizados. A expressão proteica foi avaliada por anticorpos secundários fluorescentes anti-PSMA (sigla em inglês, Antigénio de Membrana Específico da Próstata) e por exossomas fluorescentes para experiências de captura específica. Estas experiências foram efectuadas num aparelho tipo FACS, o iQUE screener, medindo exossomas conjugados com contas de látex, e exossomas livres em lâminas de vidro activadas com grupos carboxilo ou em tiras de teste por fluxo lateral. A morfologia das vesículas foi confirmada por SEM (sigla em inglês, microscopia electrónica por varrimento). O método do iQUE foi optimizado em termos de duração de centrifugação, tubos, concentração das contas de látex e soluções de bloqueio para os anticorpos. Já os protocolos de captura específica requerem mais optimizações, especialmente com soluções de bloqueio válidas para vesículas.
Keywords: cancro da próstata, exossomas, isolamento, microfluídica, PSMA, vesículas extracelulares

Discussão: novembro 21, 2016, 9:30