Dissertação

Unveiling the CCBE1 role on human iPSC-derived Cardiac Fibroblasts differentiation and functionality EVALUATED

As doenças cardiovasculares são a principal causa de morte em todo o mundo. Em particular, no enfarte do miocárdio (EM), o músculo cardíaco funcional lesado é posteriormente substituído por um tecido fibrótico composto por fibroblastos cardíacos (CF) ativados. Diversas terapias alternativas têm sido atualmente desenvolvidas, utilizando o secretoma das células para ajudar a regenerar o miocárdio, tornando, portanto, importante identificar as moléculas-chave que atuam no microambiente cardíaco. Neste contexto, a CCBE1 (collagen and calcium-EGF binding domain 1) foi detetada em percursores cardíacos durante o desenvolvimento embrionário em ratinhos. Assim sendo, o principal objetivo desta tese foi investigar o papel desta proteína ao longo da diferenciação em CF, usando uma linha hiPSC modificada através da tecnologia de interferência CRISPR (CRISPRi) para reduzir a expressão do gene CCBE1. Quer a linha celular hiPSC-WTC como as linhas celulares modificadas com o sistema CRISPRi foram diferenciadas em CF, tendo exibido claras alterações morfológicas e fenotípicas ao longo do processo. A adição diária de doxiciclina durante a diferenciação impactou o crescimento das células, mas não na sua morfologia, viabilidade e fenótipo. Ao utilizar-se um meio específico de fibroblastos suplementado com inibidor de TGF-β gerou-se um maior número de fibroblastos inativos. Os CF diferenciados conseguiram manter o seu fenótipo durante 50 dias em cultura e mostrar características típicas de fibroblastos, como poderem ser ativados e conseguirem migrar. Ao revelar o papel principal do CCBE1 na diferenciação e ativação dos CF (simulando o EM), esperamos conceder novas ideias para o desenvolvimento de terapias regenerativas direcionadas à CCBE1.
CVD, Fibrose Cardíaca, Fibroblastos Cardíacos, hiPSC, CCBE1, CRISPRi

Novembro 22, 2019, 16:30

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

ORIENTADOR

Maria Margarida Fonseca Rodrigues Diogo

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar

ORIENTADOR

Maria Margarida de Carvalho Negrão Serra

iBET/ITQB-NOVA

Investigador Auxiliar