Dissertação

Serum-free and Feeder-free Expansion of a patient-specific Fanconi Anemia Human Induced Pluripotent Stem Cell (hiPSC) line corrected by gene editing EVALUATED

As células estaminais pluripotentes induzidas humanas (hiPSC) apresentam a vantagem de poderem ser obtidas a partir de células somáticas de qualquer indivíduo. Quando obtidas a partir de um individuo afetado por uma doença genética, as iPSCs podem ser usadas para recapitular os efeitos dessa mesma doença permitindo a sua modelação bem como a pesquisa de novos fármacos. As células obtidas desta forma podem também ser usadas para terapia celular após a devida correção genética. Neste estudo, foram usadas como modelo células hiPSC geneticamente corrigidas obtidas a partir de um doente com Anemia de Fanconi, graças a uma colaboração com a Divisão de Terapias Hematopoiéticas Inovadoras em Madrid, Espanha. Esta doença genética é definida por uma marcada predisposição para o cancro e eventualmente falência da medula óssea. Foi possível definir um protocolo que permitiu a expansão desta linha celular num meio de cultura quimicamente definido (mTeSR1) e usando Matrigel como substrato de adesão. Foi possível expandir as células até cerca de seis vezes o seu valor inicial durante oito dias de cultura. Após expansão, as células mostraram uma expressão normal dos marcadores de superfície (Tra-1-60, Tra-1-81, SSEA-4) bem como dos factores de transcrição (Nanog, Sox-2, Oct-4). Para além disso as células mostram expressão normal de marcadores de células neurais (Pax6 e Nestin) após serem submetidas a um protocolo de diferenciação em linhagem neural. Foi possível demonstrar que a expansão da linha celular modelo é possível e, recorrendo ao uso de materiais de grau GMP, poderão então ser usadas para aplicações clínicas.
Células estaminais induzidas, Anemia de Fanconi, expansão celular, terapia celular, modelação de doenças

Dezembro 2, 2015, 10:0

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

ORIENTADOR

Tiago Paulo Gonçalves Fernandes

iBB - Instituto de Bioengenharia e Biociências / Instituto Superior Técnico

Doutor

ORIENTADOR

Maria Margarida Fonseca Rodrigues Diogo

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar