Dissertação

Reconstitution of Drosophila fertilization for time-lapse imaging EVALUATED

A fertilização em insetos inicia-se com a entrada de um espermatozóide pelo lado anterior do ovo. Após ativação do espermatozóide e a formação do pronúcleo paterno, pensa-se que o movimento coordenado de ambos os pronúcleos paterno e materno no citoplasma conduza à aposição pronuclear e à primeira divisão mitótica. Contudo, a sequência de eventos e a causalidade têm vindo a ser deduzidos de amostras fixas e imunocoloradas. Por isto, carecemos de relevante informação temporal e dinâmica. Como a fertilização ocorre dentro do ovo, que por sua vez é mantido dentro de um organismo vivo e preenchido com gema difrativa, qualquer conhecimento sobre microscopia temporal tem sido desafiante. O principal objetivo deste projeto foi o desenvolvimento de um ensaio para a reconstrução da fertilização em Drosophila melanogaster permitindo microscopia óptica. Tal implica o design de uma estratégia experimental na qual um pronúcleo feminino contido numa única gota de citoplasma é fertilizado com um único espermatozoide e na qual ambos os pronúcleos e o citoesqueleto associado possam ser observados com alta resolução. Ovos não fertilizados num estado de meiose foram recolhidos e observou-se a finalização da meiose. Este conhecimento é a chave para o isolamento citoplasmático do pronúcleo feminino. Por fim, foi possível realizar microscopia espaço-temporal da aposição pronuclear e da mitose em extratos de ovos recentemente fertilizados. Este novo ensaio abre novas portas ao estudo da dinâmica cromosomal durante a fertilização permitindo um conhecimento mais detalhado relacionado com a transmissão de bactérias e a incompatibilidade citoplásmica.
Drosophila melanogaster, Fertilização, Meiose, Microscopia, Pronúcleos

Novembro 13, 2015, 14:0

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

ORIENTADOR

Ivo Andreas Telley

Instituto Gulbenkian de Ciência (IGC)

Doutor

ORIENTADOR

Cláudia Alexandra Martins Lobato da Silva

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar