Dissertação

Development and Optimization of a DNA extraction protocol through microscale solid phase extraction (μSPE) and microfluidics for food analysis applications EVALUATED

A análise de ADN exige equipamentos especializados de grande dimensão, reagentes caros, pessoal altamente treinado e grandes volumes de amostra, limitando a sua aplicabilidade como análise de rotina na indústria alimentar. O trabalho desenvolvido nesta dissertação faz parte de um projeto mais alargado para o desenvolvimento de um dispositivo portátil de análise de ADN destinado a aplicações in situ na indústria alimentar. Tem havido um interesse crescente na combinação de tecnologias de microescala com procedimentos bem estabelecidos de biologia molecular para melhorar as etapas da análise de ADN: extração, amplificação e eluição. Este trabalho foca-se na primeira fase desta análise e o principal objetivo é o desenvolvimento e otimização de um protocolo de extração de ADN através de técnicas de microextração em fase sólida (μSPE) e microfluídica para análise de alimentos. Assim, foram utilizados sistemas laváveis e reutilizáveis contendo membranas descartáveis de sílica para otimizar cada etapa da extração, nomeadamente os passos de ligação, lavagem e eluição, testando um conjunto de protocolos adequados para integração em microssistemas de análise total (μTAS). Em cada passo, recolheram-se amostras para quantificação com um espectrofluorímetro de micro-volume de modo a comparar e selecionar os protocolos com melhor rendimento de extração. Um dos protocolos testados, usando um tampão de ligação com sais não-caotrópicos, um passo de lavagem livre de etanol e uma incubação curta com tampão TE para a eluição do ADN, demonstrou ter os melhores resultados relativamente ao rendimento de extração e à viabilidade do procedimento para integração num sistema de microfluídica.
Extração de ADN, Análise Alimentar, Microextração de fase sólida, Microfluídica

Novembro 24, 2015, 9:15

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

ORIENTADOR

Marta Prado Rodríguez

International Iberian Nanotechnology Laboratory (INL)

Doutora

ORIENTADOR

Susana Isabel Pinheiro Cardoso de Freitas

Departamento de Física (DF)

Professor Associado Convidado