Dissertação

Structure and Function of a Dodecameric Molecular Machine: The Human RuvBL1/RuvBL2 Complex EVALUATED

Resistance UV B-Like 1 (RuvBL1) e Resistance UV B-Like 2 (RuvBL2) são duas proteínas conservadas, idênticas à proteína bacteriana RuvB que possui funções de ATPase ADN-dependente e helicase, e pertencem à família de AAA+ ATPases. Estas desempenham um papel importante em diversas atividades celulares, incluindo a remodelação da cromatina, a transcrição, a reparação de ADN e a apoptose, fazendo parte de vários complexos multi-proteicos, tais como INO80, TIP60 e R2TP. Além disso, recentemente, foi estabelecida uma ligação entre as RuvBLs e cancro, uma vez que certas células cancerígenas demonstraram sobreexpressar as proteínas RuvBL1 e RuvBL2. Especificamente, o complexo R2TP humano é uma co-chaperona da proteína Hsp90 que contém quatro proteínas diferentes: RuvBL1, RuvBL2, RPAP3 e PIH1D1. Está envolvido na formação de complexos proteicos ou de proteínas com ARN, incluindo pequenas proteínas nucleares ribonucleicas (snoRNPs), fosfatidilinositol-3-cinase tipo cinases (PIKKs) e ARN polimerase II. Neste trabalho, o processo de purificação do complexo humano RuvBL1/RuvBL2 e as condições de expressão e processo de purificação do sub-complexo R2TP humano RuvBL1/RuvBL2/RPAP3(501-631) foram otimizados, de forma a obter o modelo atómico tridimensional destes dois complexos. Apesar das diversas tentativas, os cristais obtidos e otimizados que foram testados num difratómetro de raios-X não difrataram. Adicionalmente, foram realizados ensaios iniciais de atividade de ATPase, de forma a testar a atividade de RuvBL1/RuvBL2 e RuvBL1/RuvBL2/RPAP3(501-631).
RuvBL1, RuvBL2, RPAP3, Complexo R2TP, Cancro, Cristalografia de raio-X

Novembro 20, 2017, 17:30

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

ORIENTADOR

Tiago Miguel Guerra Miranda Bandeiras

Instituto de Biologia Experimental e Tecnológica

Doutor

ORIENTADOR

Duarte Miguel De França Teixeira dos Prazeres

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Catedrático