Dissertação

Avian Reovirus: Development of ELISA and Serum Neutralization Tests and Preliminary Gene Cloning for the Development of a Virus-Like Particle Vaccine EVALUATED

Os reovírus aviários (ARVs) são agentes patogénicos envolvidos no desenvolvimento de várias doenças, dentre as quais, as mais relevantes são a tenosinovite/artrite viral, a síndrome-de-má-absorção bem como síndromes associadas a um anormal crescimento da ave, causadores de perdas económicas na indústria. Recentemente registou-se o aumento do número de casos reportados de ARV globalmente, incluindo em Portugal, atribuídos à emergência de novas estirpes causadas por mutações na proteína de superfície σC, altamente variável, para as quais as vacinas comerciais não conferem proteção. Os objetivos deste trabalho foram o desenvolvimento preliminar de partículas semelhantes a vírus (VLPs) contra a estirpe 19371-PT12 de ARV para a produção de vacinas, usando o sistema de expressão de baculovirus em células de inseto, para controlo da doença, e os desenvolvimentos de um teste indireto de ELISA e seroneutralização de vírus (SN), para provar que soros fortemente positivos em ELISA não asseguraram a proteção contra o ARV. As proteínas σC, σA e μB foram selecionadas para a construção das VLPs, embora só tenha sido possível a amplificação e clonagem dos genes codificantes de σC e σA no vetor de transferência pIEx/Bac-1. O método de ELISA foi desenvolvido e validado para a deteção de anticorpos contra o ARV. Os coeficientes de variação para os inter e intra-ensaios foram 9.1% e 1.6%, respetivamente. Os testes de SN demonstraram que amostras de soro altamente positivas por ELISA produziram títulos neutralizantes muito baixos. Um teste de western blot imunológico, demonstrou que a produção de anticorpos não está direcionada para anticorpos neutralizantes.
Reovírus aviário, tenosivovite/artrite viral, vacinas de partículas semelhantes a vírus, ELISA indireta, teste de seroneutralização de vírus, western blot imunológico

Novembro 23, 2017, 11:0

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

ORIENTADOR

Gabriel António Amaro Monteiro

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Associado

ORIENTADOR

Ana Margarida Ferreira Henriques Oliveira Mourão

Instituto Nacional de Investigação Agrária e Veterinária

Doutora