Dissertação

Investigating Arx role in mushroom body development in Platynereis dumerilii EVALUATED

O sistema nervoso central é partilhado pela maioria dos animais com simetria bilateral e a sua origem é uma das grandes questões em Biologia Evolutiva e do Desenvolvimento. O anelídeo Platynereis dumerilii é um organismo modelo simples e adequado ao estudo do ancestral comum dos animais com simetria bilateral (Urbilateria). Possui corpos de cogumelo (CC), considerados centros de integração sensorial que poderão apresentar características ancestrais. Neste trabalho, investigou-se a função de Arx, um fator de transcrição que é especificamente expresso nos CC em desenvolvimento. Usando o sistema CRISPR-Cas9, e após testar diversos gRNAs em conjunto com proteína ou mRNA de Cas9 em diversas concentrações, duas das condições experimentais induziram mutações com tamanhos que variaram entre a eliminação de 9 pares de bases (pb) e a adição de 21 pb a jusante do homeobox de Arx. A taxa de mutação foi ~30%. Iniciou-se o estudo do fenótipo morfológico associado, mas os resultados não foram conclusivos. Este é um passo importante na compreensão do papel de Arx no desenvolvimento dos CC, abrindo caminho ao estabelecimento de uma linha de animais com este gene mutado. Adicionalmente, estudou-se as respostas neuronais na cabeça de uma larva com 6 dias face à exposição a 1 mM de dopamina, fenilacetaldeído e putrescina. Os resultados obtidos sugerem que os CC são ativados por fenilacetaldeído e putrescina. Contudo, não foi possível retirar mais conclusões. Esta experiência prova que se pode testar múltiplos estímulos químicos num mesmo chip, sem que haja contaminação das outras correntes de entrada.
evolução do sistema nervosa central, Platynereis dumerilii, corpos de cogumelo, Arx, CRISPR-Cas9, imagiologia de cálcio

Novembro 30, 2017, 9:0

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

ORIENTADOR

Jorge Humberto Gomes Leitão

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Associado

ORIENTADOR

Detlev Arendt

Developmental Biology Unit, European Molecular Biology Laboratory

Professor