Dissertação
Towards the production of MMP cleavable PEG-Hydrogel for cell migration assessment for wound healing EVALUATED
Migração e proliferação celular no processo de cura de feridas são caracterizados pela degradação da matriz extracelular por MMPs. Neste trabalho são discutidas todas as etapas necessárias para a produção de PEG-MAL hidrogel pela reação de adição tipo Michael, capaz de ser especificamente clivado por MMP-14 e funcionalizado com péptidos de adesão celular. As sequências peptídicas usadas foram sintetizadas por SPPS e purificadas por HPLC. A deteção da oxidação nos resíduos de cisteína foi feita pelo teste de Ellman e foi avaliado e otimizado o processo de redução com resina TCEP ou diretamente com TCEP. Foi estabelecido que o uso direto de TCEP é mais adequado para a produção do hidrogel. A toxicidade do TCEP foi avaliada com células NMuMG e foi concluído um relevante efeito mesmo em concentrações reduzida, apesar disso células foram capazes de proliferar num PEG gel previamente tratado com TCEP, após de este ser lavado. Diferentes sequências peptídicas foram utilizadas, CRGDS e CGGGRGDS, para funcionalizar o hidrogel, tendo observado um aumento considerado de adesão e proliferação para sequência CRGDS na superfície do hidrogel. Finalmente, a deteção da migração celular em 3D, foi testada com hidrogéis de colagénio, que continham variadas concentrações de FBS, utilizando células MDA-MB-231 e NMuMG. Este trabalho serve como o ponto de partida para o desenvolvimento e otimização de um de hidrogel PEG, que será capaz de avaliar a migração proteolítica celular, mediada especificamente por MMP-14, através de uma matriz 3D e possivelmente poderá ter aplicação na aceleração da cicatrização em feridas crónicas.
novembro 13, 2017, 10:30
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