Dissertação
The effect of key process parameters on human mesenchymal stem cell expansion and harvest EVALUATED
É de esperar que as células estaminais do mesênquima humanas, hMSCs, revolucionem a indústria da saúde devido às suas propriedades terapêuticas. A sua presença escassa no organismo exige plataformas de produção a larga escala para produzir doses relevantes de células. Para tal, a otimização de parâmetros-chave do bioprocesso é necessária para melhorar a produtividade celular. Apesar de meios contendo soro fetal bovino (FBS) serem utilizados em muitas aplicações clínicas, é necessário reduzir/eliminar a dependência a este suplemento pois levanta problemas de segurança, disponibilidade e variabilidade. Meios serum-free têm sido introduzidos como potenciais substitutos. O efeito da privação do soro foi avaliado durante três passagens e resultou em menores níveis de crescimento celular e atividade metabólica devido à falta de fatores de adesão/crescimento. As células aumentaram em tamanho, mantiveram a capacidade de multipotência e o potencial clonogénico diminiu. O PRIME-XV EXPANSION SFM promoveu maiores níveis de expansão do que condições de cultura tradicionais, as células apresentaram menores dimensões e a morfologia fusiforme. Dado que as hMSCs constituem a base do produto nas terapias celulares, a colheita é tão importante quanto a estratégia de expansão. Um estudo inicial em monocamada foi conduzido para testar e selecionar os agentes de dissociação com o melhor desempenho na separação para posterior uso em culturas de spinner flasks. TrypLE Express foi considerado o melhor agente para colher as hMSCs de microcarriers P102-L com um novo protocolo. As células retiveram a capacidade proliferativa e o imunofenótipo. O nicho de hMSCs foi considerado puro na população originalmente analisada.
novembro 24, 2014, 11:0
Publicação
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Orientação
ORIENTADOR
Cláudia Alexandra Martins Lobato da Silva
Departamento de Bioengenharia (DBE)
Professor Auxiliar