Dissertação

High-Throughput Resin Screening for the Purification of Aspartic Proteases by Expanded Bed Adsorption EVALUATED

Utilizou-se tecnologia high-throughput para analisar a performance de adsorção das resinas cromatográficas de modo de adsorpção misto CaptoTM MMC, NuviaTM cPrimeTM, Fastline® MM Acid e Fastline® MM Basic com o objectivo de purificar proteases aspárticas utilizando tecnologia EBA. Foram realizados testes cinéticos em modo batch com a enzima 1 a pH 4 e 5, 40 e 80mS/cm. Para as resinas CaptoTM e NuviaTM o estado estacionário foi atingindo quase instantaneamente. Para as resinas de EBA (Fastline®) o tempo necessário para o sistema de adsorção atingir o estado estacionário foi aproximadamente uma hora. De forma a obter as curvas isotérmicas de vários sistemas enzima/resina a várias condições de pH e conductividade, realizaram-se experiências em equilíbrio. As curvas foram ajustadas ao modelo de Langmuir. Foi observado, no geral, que com o aumento da condutividade também a capacidade de adsorção aumentava, tanto a pH 4 como a pH 5. Contudo, a afinidade das resinas com a enzima evoluia inversamente. MM Acid demonstrou uma capacidade de adsorção elevada a pH 5 e 80mS/cm enquanto MM Basic demonstrou melhores resultados a pH 5 e 20mS/cm. Na eluição utilizou-se metodologia DoE com MM Acid a pH 5 e 80mS/cm. O rendimento nunca superou 50% com o máximo a pH 6.5 e 40mS/cm. Do modelo de resposta foi possível concluir que mais estudos deveriam ser realizados. Com a enzima 2 realizaram-se experiências em equilíbrio a pH 5 e 80mS/cm utilizando Fastline® MM Acid. Concluíu-se que um trabalho mais extenso deve ser realizado com esta enzima.
Adsorção em leito fluidizado, Design de Experiências, Proteases Aspárticas, Curvas Isotérmicas

Dezembro 2, 2016, 9:0

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

ORIENTADOR

Gabriel Esteban Jaramillo Freydell

Scientist Integrated Bioprocessing DSM Biotechnology Center

Doutor

ORIENTADOR

Duarte Miguel De França Teixeira dos Prazeres

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Catedrático