Dissertação

A multimodal approach in the downstream processing of plasmid DNA EVALUATED

Atualmente, a terapia genética e a vacinação com DNA detêm um grande potencial no tratamento e prevenção de doenças genéticas e adquiridas. Apesar das vacinas de DNA oferecerem potenciais vantagens face às estratégias de vacinação tradicionais, incluindo a estimulação da resposta das células B e T, o melhoramento da estabilidade da vacina e a ausência de qualquer agente infecioso, a produção de DNA plasmídico em larga escala é ainda um problema por resolver, principalmente a sua purificação. Um processo cromatográfico alternativo baseado em ligandos multimodais está a ser desenvolvido para solucionar a problemática do isolamento e purificação deste tipo de moléculas de DNA. A cromatografia multimodal usa pequenos ligandos orgânicos sintéticos, permitindo explorar diferentes formas de interação entre a fase estacionária e os solutos na corrente de alimentação. Nesta tese, foi explorada a possibilidade de usar um ligando multimodal catiónico (CaptoTM adhere) para remover RNA de lisados de E. coli e/ou isolar as duas isoformas presentes no DNA plasmídico. Numa abordagem inicial, foram avaliadas as condições de adsorção/eluição ótimas em placas de múltiplos poços equipadas com membranas. As condições selecionadas foram depois testadas e aperfeiçoadas numa coluna comercial com 1 mL, usando como correntes de alimentação plasmídeo puro, uma mistura artificial de DNA plasmídico e RNA purificados, e lisados de E. coli. Usando uma eluição em degrau com NaCl, foi possível separar as duas isoformas de DNA plasmídico, não só nas amostras com plasmídeo purificado mas também nas misturas artificiais de plasmídeo com RNA e nos lisados de E. coli.
terapia genética, vacinas de DNA, DNA plasmídico, lisados de E. coli, cromatografia multimodal.

Dezembro 4, 2015, 15:30

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

ORIENTADOR

Duarte Miguel De França Teixeira dos Prazeres

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Catedrático

ORIENTADOR

Ana Margarida Nunes da Mata Pires de Azevedo

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Colaborador Não Remunerado Docente