Dissertação

Study of FtsH function in nuclease colicin import EVALUATED

Colicinas são proteínas tóxicas altamente específicas, produzidas por E.coli que matam bactérias vizinhas em condições de stresse ambiental, como forma de reduzir competição por recursos. As colicinas matam bactérias Gram-negativas relacionadas com E.coli, através de diversos mecanismos, sendo possível dividi-las em duas classes; enzimáticos citotóxicos, principalmente do tipo nuclease que clivam ácidos nucleicos, e colicinas formadoras de poros que despolarizam a membrana citoplasmática. As colicinas nuclease e suas proteínas de imunidade (proteínas que protegem as células contra os efeitos citotóxicos nocivos da colicina), utilizam um conjunto de interacções específicas proteína-proteína, parasitando várias funções celulares para penetrar na célula-alvo. Durante importação, colicinas nuclease tem que atravessar ambas membrana externa e interna. O meu trabalho centrou-se na etapa final da translocação de colicinas nucleases através da membrana citoplasmática. Este passo requer um processamento endoproteolitico essencial das colicinas, de forma que apenas o seu domínio C-terminal seja capaz de atingir o seu alvo no citoplasma. Este processamento é dependente da protease/ATPase FtsH presente na membrana interna, mas o seu papel catalítico ainda não foi demonstrado. Após inserção de três mutações específicas no gene estrutural ftsH, demonstrou-se que tanto a sensibilidade como a taxa de FP isolada a partir do citoplasma de bactérias tratadas com colicina, foi reduzida ou totalmente inexistente, de acordo com a diminuição da actividade catalítica provocada por mutações pontuais na protease FtsH. Os resultados aqui apresentados sugerem que a actividade catalítica de FtsH parasitada é directamente responsável pelo processamento/translocação do domínio catalítico tóxico das colicinas nuclease para o citoplasma.
Colicinas, Colicinas nucleases, Processamento, FtsH, Mutantes.

Novembro 13, 2013, 10:0

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

CO-ORIENTADOR

Miklos de Zamaroczy

Institute de Biologie Physico-Chimique

Professor

ORIENTADOR

Isabel Maria De Sá Correia Leite de Almeida

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Catedrático