Dissertação

Testing of CIM™ monolithic chromatographic supports for plasmid DNA purification EVALUATED

Devido aos rigorosos requisitos regulamentares associados à pureza e eficácia do DNA plasmídico como produto farmacêutico, a cromatografia é usualmente uma escolha no processo de downstream. Neste trabalho foram testados diferentes suportes monolíticos aniónicos para o passo captura de pDNA, onde as respectivas capacidades de ligação dinâmica (DBC) e rendimentos foram determinados e comparados com o suporte disponível CIM™ DEAE (diethylamino), no CIMTM HiP2 Plasmid Process Pack. Apesar dos similares rendimentos, CIM™ DEAE aparece como o suporte mais promissor em termos de compromisso, particularmente entre capacidade (mais de 9 mg/ml) e do sal necessário para a eluição, parâmetros que afectam fortemente a economia do passo de captura. Com vista à optimização do passo de eluição, parâmetros como o caudal, fase móvel, sal de eluição ou pH foram testados. Soluções como fosfato em alternativa à fase móvel deverão ser consideradas e mais profundamente analisadas. Para o passo de polimento, dois suportes monolíticos foram testados e comparados com CIMTM C4 HLD actualmente disponibilizado. Piridina mostrou ser o suporte mais promissor apresentando uma maior resolução entre as duas isoformas de plasmídeo, com uma DBC e rendimento similar à C4 (butyl) (acima de 3 mg/ml e 90%, respectivamente), enquanto fenil, apesar da maior DBC, apresentou a pior separação entre as isoformas, com um pior rendimento (aproximadamente 80%). A Piridina e a C4 foram igualmente eficientes em termos de eficiência de remoção das principais impurezas, mas a piridina conseguiu produzir uma maior pureza em termos de homogeneidade de plasmídeo enrolado (98%) comparativamente à C4 (95%).
Processos de Downstream, DNA Plasmídico, Cromatografia, Colunas Monolíticas

Novembro 14, 2013, 16:0

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

CO-ORIENTADOR

Urh Černigoj

Bia Separations

Doutor

ORIENTADOR

Duarte Miguel De França Teixeira dos Prazeres

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Associado