Dissertação

High throughput screening platform for embryonic development in vitro EVALUATED

O objectivo deste projecto é desenvolver um modelo in vitro de desenvolvimento embrionário do rato usando células estaminais e, portanto, imitar o período de desenvolvimento antes implantação do embrião no útero. As células estaminais embrionárias e células estaminais trofoblásticas são pipetadas para micropoços de agarose que permite que as células se organizem em estruturas que imitam o estado da mórula. O projecto nesta tese tem como objectivo melhorar a eficiência do revestimento das TSC à volta dos agregados celulares de células estaminais embrionárias. Os resultados do processo de revestimento, permitiram concluir que a inibição da via ROCK é crucial para se obter uma eficiência de revestimento mais elevada. O estabelecimento de junções aderentes entre as duas linhagens é fundamental para um revestimento adequado; a inibição da via ROCK aumenta os níveis de E-caderina e, portanto, promove o estabelecimento dessas junções entre as duas linhagens. Para aumentar ainda mais a eficiência de revestimento, foi realizado um “high throughput screen” utilizando a bibliotecta Prestwick. Entre os compostos 1200 analisados, foram encontrados 16 compostos que poderiam potencialmente aumentar a eficiência de revestimento. A etapa final da tese foi realizar um “screen” secundário para confirmar os possíveis “hits” como “hits” positivos. Os compostos triclorfão e indapamida foram identificados como “hits” positivos. A concentração óptima, foi de 20 μM para o composto Triclorfão e 5 μM para o composto indapamida.
células estaminais, blastocisto, high throughput screen, eficiência de revestimento, junções aderentes.

Junho 11, 2013, 14:30

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

CO-ORIENTADOR

Erik Vrij

Univeristy of Twente

Engenheiro

ORIENTADOR

Cláudia Alexandra Martins Lobato da Silva

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar