Dissertação

Characterization of the biological role of the RNA-binding protein FUS EVALUATED

Esclerose Lateral Amiotrófica (ELA) trata-se de uma doença neurodegenerativa cuja incidência é de 2 em cada 100,000 pessoas nos Estados Unidos. Em alguns casos de ELA depara-se com mutações na proteína de ligação a DNA/RNA, FUS/TLS (fused in sarcoma/translocated in liposarcoma). O papel biológico desempenhado por esta proteína em pacientes com ELA não é totalmente conhecida, sendo no entanto proposta uma perda de função desta proteína. Em geral é proposto que FUS esteja envolvida em processos como a transcrição ou o splicing alternativo. Dado isto, no presente projecto, foram efectuados diferentes estudos para avaliar o possível envolvimento de FUS em determinados processos biológicos, em particular, para avaliar as consequências de silenciar FUS. Primeiramente, foi efectuado um estudo sobre a influência do silenciamento de FUS sobre a taxa de crescimento de células SH-SY5Y. Foram estudados os efeitos do silenciamento de FUS nos níveis de proteínas relacionadas com o ciclo celular através de Western Blot. Foram ainda efectuados RT-PCRs de forma a revelar se o splicing de determinados genes alvo é alterado pelo silenciamento de FUS. Efectuaram-se Western Blots específicos para as proteínas correspondentes aos genes cujo splicing se verificou sofrer alterações. Observou-se que o silenciamento de FUS em células SH-SY5Y afecta a sua taxa de crescimento, diminuindo a mesma. Para além disto, verificou-se que baixos níveis de FUS nas células provocam alterações no splicing dos genes APAF1, SKP2 e CASP9, ao nível do mRNA. Observou-se ainda que o silenciamento de FUS afecta os níveis das proteínas SKP2 e CASP9.
ELA, proteína FUS, ciclo celular, splicing alternativo, SKP2, CASP9

Novembro 12, 2012, 14:30

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

CO-ORIENTADOR

Silvia Maria Luisa Barabino

University of Milano-Bicocca

Professora Associada

ORIENTADOR

Arsénio do Carmo Sales Mendes Fialho

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Associado