Dissertação

Kinetic and spectroscopic characterization of a DyP-Type peroxidase from Bacillus subtillis EVALUATED

As dye-decolourising peroxidases constituem uma nova família de enzimas hémicas que apresentam diferenças estruturais e funcionais relativamente a outras famílias de peroxidases mais estudadas. Existem poucos membros desta nova família devidamente caracterizados. Neste estudo descrevemos a clonagem, purificação e caracterização cinética e espectroscópica de uma nova DyP-peroxidase bacteriana, a BsDyP de B. subtilis MB24. Após purificação obteve-se uma proteína monomérica com 48 kDa, com um pH óptimo acídico e uma temperatura óptima de reacção entre os 20 e 35 ºC A caracterização espectroscópica revelou a presença de uma protoporfirina com máximos de absorção aos 406, 502 e 625 nm o que sugere a existência de um grupo heme hexacoordenado com uma mistura de alto e baixo spin. A ressonância de Raman também revelou uma transição entre spin baixo e alto dependente do pH. Os estudos de estabilidade indicam que a BsDyP é relativamente estável a pH 5 com uma temperatura de transição de 64ºC e um tempo de meia vida a 40ºC de 53 h. Verificou-se que na presença de peróxido a BsDyP dá origem a um composto intermediário pouco comum, que se assemelha ao composto II. A BsDyP tem capacidade de catalisar não só a oxidação dos substratos típicos das peroxidases, como também a descoloração de corantes do tipo antraquinónico e azóico como o reactive blue 5 e o mordant black 9, e ainda compostos fenólicos e não fenólicos como o álcool veratrílico sem ser necessária a adição de mediadores redox.
DyP, B. Subtilis, Resonance Raman

Novembro 28, 2012, 10:0

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

CO-ORIENTADOR

Lígia Oliveira Martins

ITQB/UNL

Professor Auxiliar

ORIENTADOR

Maria Raquel Murias dos Santos Aires Barros

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Catedrático