Dissertação

The phosphoenol-pyruvate-oxaloacetate node in Streptomycetes: a study on pyruvate carboxylase EVALUATED

Neste trabalho foi estudado o papel do nó Phosphoenolpiruvato-Piruvato-Oxaloacetato no crescimento, atividade metabólica e na produção de Actinorodina e Undecilprodegiosina por Streptomycetes um dos géneros mais usado para a produção de antibióticos. Este trabalho foca-se na carboxilação do piruvato pela enzima piruvato carboxilase, a qual tem um papel crucial nas reações anapleróticas de S. coelicolor. De forma a efetuar a análise funcional da enzima PCx em S. coelicolor, o gene que codifica esta enzima foi eliminado usando uma estratégia de eliminação baseada no uso de transposões. Entre outros resultados, a eliminação do gene que codifica a enzima PCx em S. coelicolor dirigiu o fluxo de carbono para uma maior produção de acetil-CoA o que conduziu a um aumento da quantidade de actinorrodina quando comparado com os níveis produzidos pela estirpe parental. Foi também feita uma análise in silico dos domínios previstos para esta enzima. Os resultados obtidos mostram uma elevada conservação da enzima PCx S. coelicolor com o de outras enzimas indicando que o mecanismo de catálise e regulação envolvido é, presumivelmente, similar com o de outros organismos. Na caracterização bioquímica da PCx foi possível concluir que os domínios similares à síntese da molécula carbamoilfosfato e à transferência do grupo carboxil através da biotina são essenciais à atividade da proteína. Espera-se que os resultados deste trabalho possam contribuir para um conhecimento mais aprofundando do papel do nó Phosphoenolpiruvato-Piruvato-Oxaloacetato na atividade metabólica de S. coelicolor, o que pode ser usado na manipulação genética com vista ao aumento da produção de antibióticos.
Nó PEP-PIROAA; Piruevato carboxilase

Setembro 21, 2012, 11:0

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

CO-ORIENTADOR

Paul A. Hoskisson

University of Strathclyde, Glasgow, UK

Doutor

ORIENTADOR

Nuno Gonçalo Pereira Mira

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar