Dissertação

Expression, purification and characterization of azurin derived peptides as target sequences for P-cadherin overexpressing breast cancer cells EVALUATED

Os péptidos terapêuticos são uma classe de terapêuticos com vantagens sobre anticorpos, proteínas terapêuticas e pequenas moléculas orgânicas. Muitos são desenhados a partir de truncados de proteínas terapêuticas. A azurina é uma cupredoxina de baixo peso molecular, produzida por Pseudomonas aeruginosa. Diversos estudos demonstram que a azurina tem actividade anti-cancerígena, anti-parasítica e anti-viral. A azurina comporta-se como uma proteína ?andaime?, estabelecendo interacções de grande afinidade com diferentes moléculas usando diferentes regiões. Estas características fazem da azurina uma fonte promissora de péptidos terapêuticos aplicáveis em oncologia e infecções microbianas. Neste trabalho, desenvolveu-se uma estratégia de produção de três péptidos derivados da azurina: Azu 1-50, Azu 1-77 e Azu 80-128. Recentemente, a P-caderina foi identificada como possível alvo de acção da azurina, o que impulsiona a necessidade de desenvolver um método reprodutível de produção de péptidos derivados da azurina para melhor estudar esta interacção. Os péptidos foram clonados no vector pWH844 que codifica uma cauda de histidinas no seu N-terminal. Conseguiram-se expressar Azu 1-50 e Azu 1-77 em E. coli BL21(DE3) em níveis de expressão baixos. Ambos foram purificados numa coluna Ni-NTA e trocou-se o tampão por cromatografia de exclusão molecular usando o aparelho ÄKTA PRIME. A quantidade obtida após todo o procedimento foi bastante baixa. Em conclusão, o método adoptado de produção de péptidos derivados da azurina produz pouca quantidade de péptidos e é difícil aumentar a escala de produção. É por isso necessário estudar vários aspectos do processo de modo a optimizar a produção e rendimento de todo o processo.
Péptidos terapêuticos, azurina, péptidos derivados da azurina, actividade anti-cancerígena, P-caderina, purificação, cauda de histidinas.

Novembro 23, 2011, 9:0

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

CO-ORIENTADOR

Nuno Filipe Santos Bernardes

IBB - Instituto Superior Técnico

Engenheiro

ORIENTADOR

Arsénio do Carmo Sales Mendes Fialho

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Associado