Dissertação

An Integrated Process for the Purification of Antibodies Based on Magnetic Particles and Aqueous Two-Phase Systems EVALUATED

Os anticorpos monoclonais são agentes terapêuticos largamente utilizados e com constante aumento de procura. Os métodos para a sua produção têm vindo a evoluir rapidamente, sendo produzidos cada vez em maior quantidade e maiores concentrações. Por isso, novos métodos de extracção e purificação, menos dispendiosos, eficazes e com facilidade de scale-up são necessários. A combinação da extracção em sistemas de duas fases aquosas com a separação magnética permite a purificação rápida de anticorpos com elevado rendimento e pureza. Neste estudo, sistemas de duas fases aquosas compostos por polietilenoglicol (PEG) e dextrano ou por Jeffamine e poliacrilato de sódio (NaPAA) foram suplementados com partículas magnéticas cobertas por PEG, dextrano ou Jeffamine. A presença das partículas nos sistemas aumenta a velocidade da segregação de fases. A capacidade de absorção das partículas é baixa. As partículas que mais anticorpo absorveram foram as cobertas com dextrano (44,4%), num sistema composto por 7% (m/m) PEG 3350, 5% Dextran 500000, sem adição de sal ou tampão. As interacções entre partículas e anticorpo são principalmente hidrofóbicas. Outros estudos foram feitos sobre a partição do anticorpo nos sistemas sem partículas magnéticas. A partição é controlada por interacções complexas: hidrofóbicas, exclusão molecular e electrostáticas. Os melhores resultados foram obtidos em sistemas compostos por 9% Jeffamine, 10% NaPAA or 7% PEG, 5% dextrano, com pH ligeiramente ácido (5-7) e com concentrações baixas de sal (50-100 mM NaCl). Os sistemas Jeffamina/NaPAA deram origem a coeficientes de partição mais elevados, mas nenhuma extracção resultou no aumento significativo de pureza.
Sistema de duas fases aquosas (ATPS); Partículas magnéticas; Polietilenoglicol (PEG); Dextrano; Jeffamine; Poliacrilato de sódio (NaPAA).

Novembro 25, 2011, 11:30

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

CO-ORIENTADOR

Ana Margarida Nunes da Mata Pires de Azevedo

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Doutora

ORIENTADOR

Maria Raquel Murias dos Santos Aires Barros

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Catedratico