Dissertação

Development of a yeast based platform for the screening of compounds that modulate TTR toxicity EVALUATED

A Polineuropatia Amiloidótica Familiar (PAF) é uma doença causada por mutações na proteína plasmática transtirretina (TTR). No presente trabalho desenvolveu-se uma ferramenta para identificar compostos que modulam fenótipos causados por variantes da TTR e que poderão tornar-se novos fármacos com aplicação terapêutica. Esta plataforma foi desenvolvida utilizando como modelo celular a levedura Saccharomyces cerevisiae expressando TTR tipo selvagem (WT) e as variantes Leu12Pro, Val30Met, Leu55Pro e Thr119Met. Realizaram-se validações e caracterizações deste modelo. Efectuou-se um estudo da toxicidade das variantes de TTR quando expressas em leveduras do tipo selvagem e deletadas (KO). As leveduras deletadas continham delecções em genes associados ao stress do Retículo Endoplasmático (ER stress) (hac1, dfm1, ire1 e cwh41). A expressão de TTR em levedura foi confirmada. Não se observaram fenótipos de toxicidade ao expressar TTR em levedura do tipo selvagem, hac1, dfm1 e cwh41As leveduras ire1 apresentaram um crescimento semelhante ao expressar TTR-L12P e V30M. Resultados preliminares a confirmar indicaram um ligeiro atraso no crescimento da estirpe ire1 ao expressar TTR WT. Efectuaram-se ainda estudos iniciais para o desenvolvimento de um modelo em levedura para investigar as consequências celulares da interacção da TTR e do péptido Abeta42 envolvido na progressão da doença de Alzheimer. Abeta42 nativa não foi detectada nos extractos proteicos de levedura através da técnica western blot. Esta linha de trabalho continuará com Abeta42 em fusão. Numa fase posterior esta plataforma, utilizando leveduras como um organismo modelo, poderá abrir novas perspectivas e indicar novas estratégias terapêuticas na cura de doenças como a FAP.
Amiloidose; Polineuropatia Amiloidótica Familiar (PAF); Transtirretina (TTR); Levedura Saccharomyces cerevisiae; beta-amiloide

Novembro 9, 2011, 10:0

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

CO-ORIENTADOR

Patrícia Calado

BIOALVO SA

Doutora

ORIENTADOR

Frederico Castelo Alves Ferreira

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Prof Auxiliar Convidado