Dissertação

Elucidation of endogenous haematopoietic cytokines production in a three-dimensional biomimicry of human bone marrow EVALUATED

A recriação da hematopoiese ex vivo é importante para se obter um melhor entendimento dos mecanismos que a regulam bem como para o desenvolvimento das suas possíveis aplicações clínicas. Previamente foi descrito um modelo 3D da medula óssea na forma de uma matriz de poliuretano revestida com colagénio do tipo I, capaz de expandir células mononucleadas do cordão umbilical em condições livres de adição de citocinas, soro animal e co-cultura com células do estroma. Foi avançada a hipótese que existia a produção de citocinas pelas células cultivadas, sendo o projecto em questão desenhado para pesquisar essa produção. Estudos de viabilidade mostraram a capacidade do sistema para expandir as células durante quatro semanas. A análise dos cytospins mostrou a manutenção da capacidade de gerar múltiplas linhagens, além da preferência pelos eritrócitos nas culturas com suplemento de eritropoietina, resultados confirmados pela citometria de fluxo que registou um aumento dos marcadores eritropoiéticos combinados com uma perda de expressão do CD38, um marcador de linhagem mielóide. Nos eritrócitos notou-se um aumento em células imaturas com a queda do número de glóbulos vermelhos. A expressão genómica confirma os resultados, com a activação de genes como o EPOR sugerindo o destino eritropoiético e com a expressão de TNF e TGF surgindo como uma explicação para a manutenção das células num estado primitivo. Descobriu-se ainda uma aparente pausa no mecanismo de transição de hemoglobina. No futuro o uso de testes quantitativos de expressão genómica bem como análises proteómicas poderá ajudar a caracterizar o sistema mais pormenorizadamente.
Hematopoiese, biomimética da medula óssea, células estaminais do cordão umbilical, cultura sem soro animal, cultura sem estroma, níveis fisiológicos de citocinas

Novembro 24, 2011, 15:0

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

CO-ORIENTADOR

Athanasios Mantalaris

Imperial College London

Professor

ORIENTADOR

Cláudia Alexandra Martins Lobato da Silva

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar