Dissertação

Tools for transient manipulation of HSC using non-integrating retroviral vectors EVALUATED

As células estaminais hematopoiéticas (CEHs) fornecem uma fonte de reposição de células sanguíneas que podem ser usadas no tratamento de doenças hematológicas hereditárias e adquiridas. A manipulação das propriedades das CEHs antes do transplante tem o potencial para melhorar a eficácia, e para adequar os requisitos para problemas clínicos específicos. O desenvolvimento de vectores lentivirais não integrativos de modo a expressar genes de modo transitório, eventualmente levará a aplicações de sobrevivência melhorada, crescimento e enxerto das CEHs. Estudos anteriores mostraram que CD26/dipeptidilpeptidase IV (DPPIV) tem um papel importante no homing / mobilização das CEHs para e da medula óssea em modelos de rato. O presente estudo investiga a potencialidade do uso de vectores lentivirais não integrativos (VLNI) para silenciar o gene CD26 em hCEH pela expressão de siRNA. Avaliou-se qual das construções pGIPZ deu o melhor silenciamento pela transdução de células ED7R com os diferentes vírus pGIPZ integrativos produzidos, onde se mostrou potencial na aplicação destas contruções RNAi para este fim para os hairpin ?7? e ?V?. De seguida o sistema poderá ser provado pela transdução das células estaminais CD34+ com a versão não integrativa do hairpin. Adicionalmente, houve uma tentativa de caracterizar a eficiência dos VLNI?s em CEHs planeando a produção de VLNI?s com cassetes para expressarem genes múltiplos com promotores bidireccionais, usando o sistema Cre/Lox. Viu-se uma boa eficiência do sistema Cre/Lox nas células HT1080 com VLNI?s, mostrando o potencial na sua aplicação em CEH.
CEH; Vector lentiviral; shRNAmir; Transiente; CD26; coexpressão transgénica múltipla

Novembro 24, 2011, 14:0

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

CO-ORIENTADOR

Steven Howe

Dept of Infection & Immunity, Faculty of Population Health Sciences

Doctor of Philosophy/ Senior Research Associate

ORIENTADOR

Cláudia Alexandra Martins Lobato da Silva

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar