Dissertação

Establishment of a fed-batch fermentation process and scale-up to 50 L volume for the production of a recombinant human cytochrome EVALUATED

O tema do presente estudo foi o estabelecimento e aumento de escala (50 L) de um processo de fermentação em fed-batch para a produção de um citocromo recombinante co-expresso em Escherichia coli. Estes citocromos são necessários como biocatalisadores para a preparação de metabolitos oxidados para serem usados, por exemplo, em estudos farmacêuticos como compostos de referência. Como primeiro objectivo pretendia-se atingir uma elevada densidade celular e, simultaneamente, uma elevada actividade específica, ou seja, aumentar a produção enzimática, através de uma fermentação em fed-batch num fermentador de 20 L. As fermentações mais bem sucedidas, realizadas com um meio modificado e alimentação de com uma fonte de carbono, permitiram obter elevadas produtividades enzimáticas. Deste modo a produção enzimática foi aumentada 15 vezes, em comparação com o método anteriormente usado. Apesar destes resultados, a utilização de um meio e alimentação alternativo permitiu diminuir a queda de actividade enzimática específica após cultura prolongada. Deste modo, a prática que melhor serve uma produção efectiva é a seguinte: fermentação com o segundo meio e alimentação, uma temperatura de cultura controlada e teste de bioconversão realizado com um baixo OD600. As condições optimizadas no fermentador de 20 L foram depois utilizadas com sucesso para aumentar a escala do processo até um volume de 50 L.
Citocromo, citocromo b5, elevada densidade celular, produtividade enzimática

Novembro 10, 2010, 11:0

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

CO-ORIENTADOR

Matthias Kittelmann

Novartis Pharma. Inst. of BioMedical Research

ORIENTADOR

Duarte Miguel De França Teixeira dos Prazeres

Departamento de Engenharia Química e Biológica (DEQB)

Professor Associado