Dissertação

Screening of molecular biomarkers in the yeast model relevant for the diagnosis of the toxicity of the insecticide carbofuran and the herbicide MCPA-methyl ester in the environment EVALUATED

O presente trabalho teve por objectivo identificar genes/ORFs que podessem ser relevantes como biomarcadores para o diagnóstico da presença do herbicida MCPA-ME e do insecticida carbofurão em amostras ambientais e inferir acerca dos mecanismos de toxicidade destes pesticidas, utilizando Saccharomyces cerevisiae como organismo modelo. Para este fim avaliaram-se as alterações induzidas nos perfis globais de expressão genética pela exposição deste organismo à concentração de cada pesticida que inibe em 20% a taxa específica de crescimento (IC20), durante 2h, utilizando para tal Affymetrix GeneChip Yeast Genome 2.0 arrays. Os genes/ORFs cuja expressão, de acordo com os dados obtidos através dos microarrrays, foi significativamente alterada (lb of FC=>1.5 ou <= -1.5) foram agrupados em categorias funcionais sobrerepresentadas (p-value>0.1, de acordo com a base de dados do MIPS e utilizou-se o software STRING para prever interacções proteína-proteína ao nível físico e funcional entre as proteínas codificadas. Investigou-se ainda a ocorrência de proteínas homólogas às codificadas pelos genes cuja expressão foi mais significativamente alterada (lb of FC=>2 ou >=-2) em eucariotas superiores de relevância do ponto de vista ecológico. A subsequente análise dos dados obtidos através dos micorarrays permitiu-nos seleccionar um conjunto de genes/ORFs que pudessem ser relevantes como possíveis biomarcadores no diagnóstico da presença destes pesticidas. A técnica de RT-PCR foi posteriormente usada para confirmar, para os genesseleccionados, as modificações estimadas através dos microarrays, e avaliar a dependência das alterações dos níveis de expressão com a concentração de pesticida e com o tempo de exposição.
Biomarcadores, Carbofurão, Ecotoxicologia, MCPA-ME, Resposta-ao-stresse, Transcriptómica

Novembro 8, 2010, 10:0

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

CO-ORIENTADOR

Jörg Becker

Instituto Gulbenkian de Ciência

Doutor

ORIENTADOR

Ana Cristina Anjinho Madeira Viegas

Departamento de Engenharia Química e Biológica (DEQB)

Professor Auxiliar