Screening of a VHH library prepared from a dromedary immunized against recombinant first DARC extracellular domain and Staphylococcus aureus nuclease EVALUATED

Detalhes: Duffy antigen receptor for chemokines (DARC) é o receptor dos eritrócitos para os parasitas da malária, tendo grande importância para a saúde humana. Previamente, um dromedário foi imunizado com o domínio N-terminal (ECD1) de DARC fundido com nuclease de Staphylococcus aureus. Uma biblioteca de VHHs foi preparada a partir de linfócitos do dromedário, e vários VHHs foram obtidos, que reconhecem o epítopo Fy6 do ECD1. VHHs são os domínios recombinados de ligação a antigénios de anticorpos, presentes em camelídeos, desprovidos de cadeias leves. Pretendeu-se identificar VHHs que reconhecessem outros epítopos no ECD1. Esta experiência não teve sucesso mas em breve outro dromedário vai ser imunizado com o domínio ECD1 sem o epítopo Fy6, para serem produzidos estes VHHs específicos. Quando o dromedário foi imunizado, a nuclease foi apenas utlizada para facilitar o posterior processamento do ECD1. Mas decidiu-se isolar VHHs capazes de reconhecer a nuclease de Staphylococcus aureus, para desenvolvimento de testes de diagnóstico (lateral flow immunoassays - LFIA) para detectar a presença deste parasita no leite. Foram isolados 160 clones que reconhecem a nuclease de S. aureus, que correspondem a 67 sequências diferentes e que foram divididas em 9 famílias distintas. Um par de VHHs que reconhecem claramente dois epítopos diferentes na nuclease foram identificados, de modo a poderem ser utilizados para desenvolver o aparelho LFIA. Graças à sua facilidade de utilização e resultados instantânios que fornece, este tipo de dispositivo pode-se tornar uma importante ferramenta para os produtores de leite detectarem contaminação por Staphylococcus aureus.

Discussão: novembro 9, 2010, 15:0

Orientação

AUTOR

Ana Sofia Nunes da Silva (ist156393)

CO-ORIENTADOR

Olivier Bertrand

Université Paris Diderot - Paris 7

Doutor

ORIENTADOR

Isabel Maria De Sá Correia Leite de Almeida

Departamento de Engenharia Química e Biológica (DEQB)

Professor Catedrático