Dissertação

Screening of a VHH library prepared from a dromedary immunized against recombinant first DARC extracellular domain and Staphylococcus aureus nuclease EVALUATED

Duffy antigen receptor for chemokines (DARC) é o receptor dos eritrócitos para os parasitas da malária, tendo grande importância para a saúde humana. Previamente, um dromedário foi imunizado com o domínio N-terminal (ECD1) de DARC fundido com nuclease de Staphylococcus aureus. Uma biblioteca de VHHs foi preparada a partir de linfócitos do dromedário, e vários VHHs foram obtidos, que reconhecem o epítopo Fy6 do ECD1. VHHs são os domínios recombinados de ligação a antigénios de anticorpos, presentes em camelídeos, desprovidos de cadeias leves. Pretendeu-se identificar VHHs que reconhecessem outros epítopos no ECD1. Esta experiência não teve sucesso mas em breve outro dromedário vai ser imunizado com o domínio ECD1 sem o epítopo Fy6, para serem produzidos estes VHHs específicos. Quando o dromedário foi imunizado, a nuclease foi apenas utlizada para facilitar o posterior processamento do ECD1. Mas decidiu-se isolar VHHs capazes de reconhecer a nuclease de Staphylococcus aureus, para desenvolvimento de testes de diagnóstico (lateral flow immunoassays - LFIA) para detectar a presença deste parasita no leite. Foram isolados 160 clones que reconhecem a nuclease de S. aureus, que correspondem a 67 sequências diferentes e que foram divididas em 9 famílias distintas. Um par de VHHs que reconhecem claramente dois epítopos diferentes na nuclease foram identificados, de modo a poderem ser utilizados para desenvolver o aparelho LFIA. Graças à sua facilidade de utilização e resultados instantânios que fornece, este tipo de dispositivo pode-se tornar uma importante ferramenta para os produtores de leite detectarem contaminação por Staphylococcus aureus.
Anticorpos de cadeia pesada, VHH, Duffy antigen receptor for chemokines, Staphylococcus aureus, Lateral flow immunoassay

Novembro 9, 2010, 15:0

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

CO-ORIENTADOR

Olivier Bertrand

Université Paris Diderot - Paris 7

Doutor

ORIENTADOR

Isabel Maria De Sá Correia Leite de Almeida

Departamento de Engenharia Química e Biológica (DEQB)

Professor Catedrático