Dissertação

Microfluidic Devices: Gradient Generation and Control of Local Cellular Environment for Biomedical Applications Gradient Generation and Control of Local Cellular Environment for Biomedical Applications EVALUATED

Tecnologia microfluídica, como área emergente e promissora para investigação da relação estímulo-resposta e da dinâmica espaço-tempo no comportamento celular, visa a criação de sistemas de canais em micro-escala para miniaturização e paralelização de sistemas de culturas e inovação de microarrays em fluxos contínuos. O objectivo deste projecto consistiu no desenvolvimento de uma plataforma microfluídica para controlo do espaço-tempo do ambiente bioquímico local ao nível de um grupo de células Saccharomyces cerevisiae e da monitorização da expressão controlada de uma proteína envolvida na doença de Parkinson, alfa-sinucleína (αSyn-GFP). Numa fase inicial, estruturas Y foram projectadas e simuladas em COMSOL, para estabelecer geração de gradientes biomoleculares ao longo de microcanal principal (0,5-1,5 µL/min), recorrendo a soluções de FITC e H2O. Da optimização da estrutura Y resultou um microcanal de dimensões 20 mm x 200 µm x 6 µm com traps em U dispostas longitudinalmente. Este projecto envolveu a fabricação da plataforma microfluídica PDMS/PDMS, recorrendo à técnica de Soft Litography. Preparada a plataforma, numa segunda fase considerou-se o uso de S. cerevisiae VSY72, com 2 cópias de genes SNCA (WT) inseridas no genoma que codificam proteína αSyn-GFP sobre controlo do promotor induzível GAL; as células encontravam-se em fase exponencial em meio rafinose 1%. A plataforma foi carregada com células, foram estabelecidos os gradientes biomoleculares meio galactose 1% vs. rafinose (0,5 µL/min) e analisados níveis de variação da expressão de αSyn-GFP ao longo do canal e do tempo. Os resultados obtidos confirmaram a viabilidade e eficiência da plataforma no âmbito dos objectivos propostos.
Plataforma microfluídica; Soft Litography; PDMS; microcanais; gradientes biomoleculares; alfa-sinucleína.

Julho 1, 2010, 10:30

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

CO-ORIENTADOR

Tiago Fleming Outeiro

Instituto de Medicina Molecular - Faculdade de Medicina da Universidade de LIsboa

Investigador

ORIENTADOR

João Pedro Estrela Rodrigues Conde

Departamento de Engenharia Química e Biológica (DEQB)

Professor Catedrático