Dissertação

Identification and analyses of genes influencing the biosynthesis of alginate in Pseudomonas fluorescens EVALUATED

O alginato é um polissacárido amplamente utilizado industrialmente onde é extraído das algas castanhas, sendo também produzido como um polissacárido extracelular por bactérias pertencentes aos géneros Pseudomonas e Azotobacter. Em termos moleculares, o alginato é um copolímero linear constituído pelos monómeros monómeros ácido-beta-D-manurónico (M) e ácido-alpha-L- gulurónico (G). Este trabalho apresenta uma análise de genes que influenciam a biossíntese de alginato numa estirpe geneticamente modificada, sendo a produção de alginato controlada através da adição de um indutor externo. Neste trabalho dezoito estirpes mutantes foram seleccionadas da biblioteca de transposões (SBW25MSIdeltaalgC::TnKB61) e posteriormente quantificadas para produção de alginato através de um screen. O alginato produzido por cada estirpe mutante foi quantificado pela medição da actividade do enzima alginate liase (AlgL), que degrada o polímero em pequenos monómeros. A produção de alginato foi estimada medindo a densidade óptica a 230 nm. De seguida, quatro mutantes foram seleccionados do screen: um incapaz de produzir de alginato (Pf2501) e três capazes de produzir (Pf5833, Pf5904 and Pf962). As quatro sequencias de nucleótidos contendo os genes interrompidos pela inserção do transposão foram comparadas com o genoma completo da estirpe Pseudomonas fluorescens SBW25. A análise bioinformática revelou genes que codificam as proteínas: aconitase hidratase (Pf2501), beta-galactosidase (Pf5833), catalase KatA (PF5904) e citocromo C biogênese CcmC (Pf962). Por fim, foi desenvolvida uma nova estirpe mutante (PfC02) a partir da estirpe mutante P. fluorescens SBW25mucA-HE230 e com base no gene interrompido aconitase, afim de demonstrar que o fenótipo do mutante original (Pf2051) não é causado por mutações secundárias.
alginato, biosíntese do alginato, ensaio do alginato, Pseudomonas fluorescens, inserção do transposão, aconitase

Novembro 20, 2009, 9:30

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

CO-ORIENTADOR

Scient Helga Ertesvåg

NORWEGIAN UNIVERSITY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY

Especialista

ORIENTADOR

Isabel Maria De Sá Correia Leite de Almeida

Departamento de Engenharia Química e Biológica (DEQB)

Professor Catedrático