Dissertação

Engineering baker's yeast as a cell factory for vanillin production EVALUATED

Nos últimos anos a engenharia de vias metabólicas tem sido utilizada no sentido de desenvolver/melhorar fábricas celulares. Através da descoberta de passos limitantes de uma via é possível diminuir a produção de subprodutos e aumentar a síntese de um dado produto. A vanilina é um composto aromático recentemente sintetizado de uma forma heteróloga por células modificadas de Saccharomyces cerevisiae. Contudo, acoplada a esta produção está uma acumulação significativa de intermediários da sua via biossintética. No presente estudo, este problema foi estudado através da super-expressão de duas enzimas pertencentes à via biossintética, nomeadamente a ACAR (redutase de aminoácidos carboxílicos aromáticos) e a HsOMT (O-metiltransferase de Homo sapiens). Estirpes com uma cópia extra dos respectivos genes foram caracterizadas fisiologicamente em fermentadores controlados. Contudo, não se verificou uma alteração significativa na produção de glucovanilina. Na estirpe com o gene da ACAR super-expresso, ocorreu uma diminuição não muito significativa, na produção de PAC (ácido protocatecuico), o que pode indicar que a disponibilidade desta enzima não é um factor limitante da via biossintética. Pelo contrário, a super-expressão do gene da HsOMT, embora desenvolvendo uma aparente auxotrofia para aminoácidos aromáticos, levou a uma diminuição significativa da acumulação de intermediários e a um aumento da produção de glucovanilina. Durante a caracterização fisiológica foi também observado que a produção total de metabolitos da via biossintética da vanilina é sensível à concentração inicial de glucose, mas não à distribuição relativa do fluxo de carbono entre os diferentes intermediários e o produto final.
Engenharia de vias, vanilina, caracterização fisiológica, expressão heteróloga de genes

Novembro 10, 2009, 10:15

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

CO-ORIENTADOR

Kiran Raosaheb Patil

Center for Microbial Biotechnology, Department of  Systems Biology, DTU

Especialista

ORIENTADOR

José Monteiro Cardoso de Menezes

Departamento de Engenharia Química e Biológica (DEQB)

Professor Auxiliar