Dissertação

Implementation of COM domains in module shuffling of NRPS in Saccharomyces cerevisiae EVALUATED

NRPs (nonribosomal peptides) pertencem ao grupo de produtos naturais, caracterizado por uma variedade de actividades biológicas relacionada com uma diversidade estrutural inerente a este tipo de compostos. A biossíntese destes péptidos envolve um complexo enzimático modular, no qual cada módulo é responsável pela incorporação de um aminoácido. A comunicação entre NRPS (nonribosomal peptide synthetase) de um mesmo complexo enzimático depende da interacção entre pares aceitador/doador de domínios de comunicação mediada (COM). O objectivo deste trabalho consiste na implementação do referido sistema de comunicação tendo em vista estratégias de shuffling de módulos de NRPS. Assim, um sistema de plasmídios, contendo dois módulos retirados de diferentes NRPSs bacterianas (tycA e srfAC), foi expresso com sucesso em Saccharomyces cerevisiae. A produção do dipéptido previsto, foi confirmada por LC-MS. Os domínios COM da referida NRPS artificial, foram unidos especificamente a ambas as partes de uma NRPS trimodular previamente dividida em dois plasmídios. Posteriormente, estes novos plasmídios foram expressos em levedura. A expressão de três pares NRPS dissociada, nomeadamente, ACVS, PCVS e HCVS, foi demonstrada recorrendo a microscopia de fluorescência, particularmente, fusão de proteínas fluorescentes a ambas as partes da respectiva NRPS. A produção de ACV relativa à estirpe que contem a ACVS dissociada, não foi detectada por LC-MS. Este resultado implica uma reduzida eficiência do sistema ou alternativamente interferência na linha de montagem biossintética afectando a funcionalidade do sistema. Todavia, os domínios COM tem um grande potencial no que diz respeito ao design racional e combinatório para revelar novos compostos bioactivos.
NRPS, domínio COM, Saccaromyces cerevisiae, biossíntese

Dezembro 2, 2008, 16:0

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

CO-ORIENTADOR

Verena Siewers

DTU - Universidade Técnica da Dinamarca

Especialista

ORIENTADOR

Isabel Maria De Sá Correia Leite de Almeida

Departamento de Engenharia Química e Biológica (DEQB)

Professor Catedrático