Dissertação

Studies on the involvement of mucoid phenotype in bacteria from Burkholderia cepacia complex: gene identification and microarray design EVALUATED

As bactérias do complexo Burkholderia cepacia (BCC) são importantes patogénios oportunistas em pacientes com fibrose quística (FQ) e imunocomprometidos. Um dos hipotéticos factores de virulência nestas bactérias é a produção do exopolissacárido (EPS) cepaciano produzido por estirpes de todas as espécies de Burkholderia. O agrupamento genético bce I envolvido na biossíntese de cepaciano é conhecido mas, estudos in silico, identificaram a existência de um segundo agrupamento designado por bce II, compreendendo 9 genes adicionais. Neste trabalho construíram-se três mutantes de inserção em genes do agrupamento bce II que codificam para uma suposta glicosiltransferase BceR, uma putativa translocase BceQ, e uma suposta aciltransferase BceS. As mutações nos genes bceR e bceQ impediram a biossíntese de cepaciano, mas a mutação em bceS apenas retardou a produção de cepaciano e diminuiu o grau de acetilação em aproximadamente 25%. Para compreender os mecanismos de regulação da biossíntese de cepaciano, desenhou-se um microarray da Affymetrix (Bcc1sa520656F) baseado no genoma de B. multivorans ATCC17616 e B. cenocepacia J2315. Um total de 14824 sondas para 12489 genes de ambos os genomas encontra-se representado no microarray. Optimizou-se a extracção de RNA partindo de dois isolados isógenicos sequenciais de B. multivorans produtor e não-produtor de cepaciano obtidos de um paciente de FQ e da estirpe B. cepacia IST408 e do seu mutante IST408bceF::Tp crescidos em condições de cultura apropriadas. A futura análise transcriptómica destas estirpes pretende compreender a conversão do fenótipo mucoso em não-mucoso e a sua correlação com a gravidade e progressão da doença em pacientes com FQ.
Complexo Burkholderia cepacia, Affymetrix microarrays, Exopolissacárido cepaciano, Agrupamento genético bce II

Outubro 8, 2008, 14:0

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

CO-ORIENTADOR

Jorg Becker

IGC, Instituto Gulbenkian de Ciência

Especialista

ORIENTADOR

Leonilde de Fátima Morais Moreira

Departamento de Engenharia Química e Biológica (DEQB)

Professor Auxiliar