Dissertação

Ex-vivo Expansion of Hematopoietic Stem/Progenitor Cells: Optimization of a Human Stromal-based Culture System EVALUATED

Neste trabalho pretendeu-se optimizar um sistema de cultura previamente estabelecido, com células de estroma humano, derivado de células estaminais do mesênquima (MSC) da medula óssea (BM), para suportar a expansão/manutenção ex-vivo de células estaminais/progenitoras hematopoiéticas humanas do sangue do cordão umbilical. Estudou-se o efeito da densidade celular inicial na expansão de BM MSC, encontrando-se um valor óptimo de 3000 células/cm2. As BM MSC foram então tratadas com diferentes concentrações de Mitomicina C e foi avaliado o seu efeito no crescimento celular, viabilidade, perfis metabólicos e capacidade de suportar a hematopoiese. Obteve-se uma concentração óptima de 0,5 microgram/ml que foi utilizada para inactivar o crescimento das BM MSC antes da co-cultura. A optimização da composição do meio de cultura para as células hematopoiéticas (CD34+-enriquecidas) consistiu em avaliar o efeito de: i) adição de trombopoietina (TPO); ii) aumento da actividade do factor leukemia inhibitory factor (LIF); e iii) adição do agente quelante de iões cobre, tetraetilenopentamina (TEPA), à combinação original de citocinas. A adição de TPO e o aumento da actividade de LIF levou a um melhoramento significativo da expansão de células totais hematopoiéticas, enquanto que a adição de TEPA foi importante para a manutenção das células estaminais/progenitoras hematopoiéticas. Foi estudada ainda a importância do contacto directo entre as células hematopoiéticas e de estroma. Os níveis de expansão do total de células hematopoiéticas foram significativamente diminuídos na ausência de contacto directo com o estroma. Demonstrou-se também que o contacto directo com o estroma é crucial para a manutenção das células estaminais/progenitoras hematopoiéticas.
Células estaminais/progenitoras hematopoiéticas, Células de estroma, Expansão ex-vivo, Citocinas

Julho 20, 2007, 14:30

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

CO-ORIENTADOR

CLÁUDIA ALEXANDRA MARTINS LOBATO DA SILVA- Investigadora

Instituto Superior Técnico

Especialista

ORIENTADOR

Joaquim Manuel Sampaio Cabral

Departamento de Engenharia Química e Biológica (DEQB)

Professor Catedrático