Dissertação

Optimization of an insect-based manufacturing platform for AAV vectors EVALUATED

Existe uma grande procura por vetores virais baseados em vírus adeno-associados (AAV) devido à sua habilidade de infetar uma enorme variedade de tecidos sem despoletar uma resposta imunológica significante. Estes já têm sido utilizados em mais de 150 testes clínicos, no entanto, a produção destes vetores em grandes quantidades e cumprindo com boas práticas de produção (GMP) é ainda um desafio, levando a que muitas plataformas tecnológicas estejam a competir por este nicho. As limitações de expansão e de produção são ultrapassadas através da utilização do sistema de expressão de vetores de baculovirus em células de inseto (IC-BEVS). Neste trabalho tentou-se atuar sobre o metabolismo celular durante a infeção objetivando a melhorar a produção de vírus adeno-associados recombinantes (rAAV). Para tal, adotou-se uma estratégia de Design of Experiments (DoE) para a suplementação das culturas com pequenas moléculas conhecidas por serem importantes na resposta a stress (cofatores metabólicos e açúcares alternativos) ou na produção de baculovirus (α cetoglutarato, colesterol, poliaminas) combinadas com mudanças de temperatura. Foi selecionado um design fatorial fracionado de forma a explorar efeitos de interações e diferenças de serotipos. A análise metabólica identifica as estratégias utilizadas como capazes de modular todo o metabolismo. No geral, a melhor estratégia de otimização depende daquilo que se pretende melhorar - os títulos capsídicos, de genomas virais ou até de partículas infeciosas. Compreender as diferenças que existam entre o título e a qualidade de AAV e o metabolismo celular possibilitará o desenho de novas estratégias capazes de otimizar a produção de AAV.
vírus adeno-associados (AAV), produção de AAV recombinantes (rAAV), células de inseto, suplementação, mudança de temperatura, Design of Experiments (DoE)

Novembro 23, 2018, 16:0

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

ORIENTADOR

Inês Azevedo Isidro

iBET - Instituto de Biologia Experimental e Tecnológica

Doutora

ORIENTADOR

José Monteiro Cardoso de Menezes

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Associado