Dissertação

Chemical Proteomics: mass spectrometry-based label-free quantitative approach in cell systems EVALUATED

Este projecto contempla a implementação de um método original de espectrometria de massa sem marcação e não-direccionado, exemplificando uma abordagem moderna de proteómica explorativa em sistemas celulares. Uma técnica de proteómica do tipo shotgun foi aplicada a lisados de células Caco-2 após tratamento com 4-hidroxi-2-nonenal (HNE) em gama de concentração 0 a 100 μM, utilizando o espectrómetro de massa de alta-resolução Orbitrap Fusion Tribrid para a identificação e caracterização aprofundada deste sistema biológico complexo. HNE é uma molécula eletrofílica derivada da peroxidação lipídica de ácidos gordos poli-insaturados, que desempenha um importante papel citprotector durante o stress oxidativo antes de exercer efeitos nocivos. O objectivo passou assim por obter um perfil proteico integrativo do proteoma digerido de células Caco-2, de modo a avaliar alterações proteicas e modificações pós-tradução que possam relacionar-se com a acção do HNE enquanto agente de resposta antioxidante e anti-stress. Um total de 3354 proteínas foram identificadas com nível alto de confiança, e aquelas que se mostraram diferencialmente expressas em comparação com o controlo foram agrupadas em redes interactivas na premissa de processos biológicos relevantes modulados pelo HNE. Diversas vias celulares identificadas, nomeadamente destoxificação de espécies oxigenadas reactivas, regulação e degradação proteica, organização de nucleossomas, e resposta inflamatória e imunitária, apresentaram grande interesse para ser exploradas e validadas no âmbito de potenciais compostos bioactivos e marcadores de stress oxidativo, enfatizando a importância da proteómica de espectrometria de massa ao nível pré-clínico de estudos farmacêuticos.
proteómica quantitativa, espectrometria de massa, análise proteómica funcional, HNE, stress oxidativo, resposta antioxidante  

Novembro 9, 2018, 14:0

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

ORIENTADOR

ALFONSINA D’AMATO

UIVERSITÀ DEGLI STUDI DI MILANO

Senior Researcher

ORIENTADOR

Maria Matilde Soares Duarte Marques

Departamento de Engenharia Química (DEQ)

Professor Catedrático