Dissertação

Mechanistic Explanation for Protein Binding with Dual Salt Systems in Hydrophobic Interaction Chromatography EVALUATED

A utilização de soluções-tampão preparadas a partir de misturas de sais com valores \mbox{liotrópicos} diferentes surgiu com o objectivo de aumentar a capacidade de adsorpção dinâmica (DBC) em Cromatografia de Interacção Hidrofóbica. De modo a confirmar as conclusões desse estudo, os sais utilizados nas misturas definidas anteriormente foram analisados considerando-se os dois factores que podem influenciar a DBC: a tensão superficial e a força iónica das soluções usadas nas amostras de proteína e de ligação à coluna, utilizando lisozima e um anticorpo monoclonal modelo como proteínas testadas. Inicialmente, foram estudadas soluções-tampão diferentes com tensão superficial semelhante. Numa segunda fase, foram testadas soluções-tampão com força iónica idêntica. Os resultados obtidos na primeira série de experiências originaram uma gama muito ampla de valores, enquanto que os resultados da segunda série mostraram que as soluções-tampão com força iónica semelhante conduziram a uma menor dispersão dos valores da DBC. Este trabalho mostrou que a força iónica afecta a DBC de forma mais significativa que a tensão superficial e que uma solução-tampão preparada com um único sal pode originar uma DBC semelhante à das misturas de sais. Assumiu-se que DBCs superiores em misturas de dois sais se devem ao facto de o sal com menor incremento de tensão superficial se acumular à superfície da proteína. Posteriormente, de modo a compreender o porquê de diferentes sais provocarem diferentes efeitos nas proteínas, colocou-se uma outra hipótese baseada na camada de hidratação da proteína.
Mistura de dois sais, capacidade de adsorção dinâmica, tensão superficial, força iónica, curva de viragem.

Novembro 13, 2018, 11:0

Documentos da dissertação ainda não disponíveis publicamente

Orientação

ORIENTADOR

Alois Jungbauer

BOKU

Doutor

ORIENTADOR

Ana Margarida Nunes da Mata Pires de Azevedo

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar