Dissertação

Enzyme stabilization with solid-phase triazine-scaffolded biomimetic ligands EVALUATED

Ligandos sintéticos que mimetizam a estrutura e as interações de ligandos biológicos naturais são designados biomiméticos. Após os primeiros usos de corantes têxteis como ligandos de pseudo-afinidade, esta tecnologia foi a base do desenho racional e da síntese de novo de ligandos sintéticos de afinidade baseados na triazina. Esta abordagem foi utilizada para encontrar ligandos capazes de adsorver a cutinase com elevada afinidade, mantendo a sua atividade enzimática. O efeito estabilizador observado na cutinase com ligandos sintéticos de afinidade baseados na triazina e, particularmente, com o ligando 3'/11, constituiu a base de outros estudos com estes compostos, como sondas para aumentar a estabilidade de proteínas por adsorção. Alguns destes ligandos foram avaliados quanto ao seu potencial efeito estabilizador sobre outras enzimas. No presente trabalho, confirmou-se a elevada afinidade do ligando 3'/11 para cutinase de Fusarium solani pisi, sendo o mesmo testado quanto à sua capacidade de ligação com outras enzimas, como as lipases de Aspergillus oryzae, Candida rugosa, Chromobacterium viscosum, Rhizomucor miehei e Rhizopus niveus e a invertase de Saccharomyces cerevisiae. As enzimas CRL, CVL, RNL e invertase apresentaram rendimentos de adsorção significativos com o ligando 3'/11 – 32, 29, 36 e 94%, respetivamente –, e foi estudada a termoestabilidade das enzimas livres e adsorvidas a 60ºC. CVL e CRL foram estabilizadas quando adsorvidos ao ligando 3'/11. Nos casos da CRL e da invertase foram testados outros ligandos. Verificou-se que a CRL foi estabilizada por adsorção ao ligando 3/3’ e a invertase foi estabilizada por adsorção ao ligando 5/3'.
Termoestabilidade, interações de afinidade, ligandos biomiméticos; cutinase, lipases, invertase

Novembro 27, 2017, 16:0

Publicação

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Orientação

ORIENTADOR

Maria Ângela Cabral Garcia Taipa Meneses de Oliveira

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar