Dissertação

Single-cell quantification of the expression of plasma membrane MDR transporter Tpo3 from fluorescence imaging in Saccharomyces Cerevisiae EVALUATED

O modelo experimental Saccharomyces cerevisiae foi utilizado neste estudo para compreender os mecanismos subjacentes à adaptação e tolerância ao ácido acético, amplamente utilizado em processos de fermentação industrial. Uma das respostas adaptativas ao stress ao ácido acético em levedura é a activação da transcrição do gene que codifica o transportador de membrana plasmática envolvido na resistência a multidrogas (MDR / MXR) Tpo3, que tem especial atenção nesta tese. Esta activação é mediada pelo factor de transcrição Haa1 e pela proteína Hrk1, porque confere protecção contra o ácido acético através da redução da concentração de acetato intracelular. A abundância de proteína Tpo3 na membrana plasmática de células de levedura é avaliada por ligação da proteína GFP a este transportador e de seguida inserido no genoma da levedura e expresso na estirpe de tipo selvagem num mutante HAA1 de eliminação e num mutante HRK1 de eliminação em situação de stress com ácido acético.
Foi desenvolvido uma pipeline de processamento e a aplicação de software específico para esta análise, onde a intensidade da cor verde em células especificamente selecionadas é quantificada ao longo do eixo radial das células (a partir do centro para a membrana plasmática). O perfil de expressão é calculado em quatro pontos temporais, 0, 1, 2 e 4 horas (durante o período de latência), para as células parentais, células haa1e células hrk1expostas a uma concentração inibitória sub-letal de ácido acético (50 mM, a pH 4,0). Os resultados obtidos confirmam a localização prevista para este transportador.
Saccharomyces cerevisiae, adaptação e tolerância ao ácido acético, transportador da membrana plasmática, imagens de microscopia de fluorescência, pipeline de processamento

Novembro 22, 2016, 11:0

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

ORIENTADOR

João Miguel Raposo Sanches

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar

ORIENTADOR

Isabel Maria De Sá Correia Leite de Almeida

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Catedrático