Dissertação

Produção de proteínas membranares de Vibrio alginolyticus para vacinação EVALUATED

Apesar do seu rápido crescimento, a indústria da aquacultura também enfrenta perdas consideráveis devido às doenças infeciosas. Devido à emergência de bactérias resistentes a antibióticos, as vacinas constituem a opção mais viável para controlar e prevenir doenças infeciosas nos peixes, como a vibriose causada por bactérias do género Vibrio. O objetivo principal deste trabalho consiste em produzir um extrato de proteínas de membrana externa (OMPs) de Vibrio alginolyticus e purificá-lo de modo a enriquecê-lo na proteína OmpK, uma potencial vacina contra a vibriose. Foram realizadas extrações por centrifugação e ultracentrifugação combinadas com solubilização mediada pelos tensioactivos sarkosyl, Triton X-100 ou SDS. O sarkosyl 1% (p/v) foi o mais adequado para a extração com rendimentos de 5,6 mg de OmpK/L e 1,8mg de OmpK/L de meio de cultura DO=4 respetivamente por centrifugação e ultracentrifugação. Ensaios de cromatografia de troca aniónica e de interação hidrofóbica sobre o extrato centrífugo mostraram uma elevada similaridade nas propriedades das OMPs, impedindo o seu fracionamento. A ultrafiltração por membranas dos extratos centrífugos de Triton X-100 e de sarkosyl mostrou que as interações das OMPs com sarkosyl impedem a permeação proteica enquanto esta é permitida para Triton X-100. O extrato ultracentrífugo com sarkosyl 1% (p/v) foi o mais adequado para isolar as OMPs e possibilitar a purificação de OmpK, mas origina um rendimento proteico reduzido. Contudo, a ultracentrifugação não é realizável em larga escala, tornando improvável a produção de quantidade suficiente da proteína OmpK nativa para vacinar peixes em aquacultura.
Extração de proteínas de membrana, OmpK, Vibrio alginolyticus, purificação de proteínas de membrana, sarkosyl, Triton X-100

Dezembro 7, 2016, 17:30

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

ORIENTADOR

Marília Clemente Velez Mateus

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar

ORIENTADOR

Gabriel António Amaro Monteiro

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Associado