Dissertação
Derivation, characterization and purification of multipotent cardiovascular progenitor cells derived from human induced pluripotent stem cells EVALUATED
As células estaminais pluripotentes induzidas (iPSCs) podem diferenciar-se em todos os tipos de células no corpo humano, incluindo todos os tipos de células cardíacas. Contudo, terapias envolvendo derivados de iPSCs estão limitadas pelo potencial tumorigénico destas, que precisam de ser removidas antes do uso clínico. Este trabalho pretendeu produzir células progenitoras cardiovasculares (CVPCs) altamente puras a partir de iPSCs humanas por diferenciação e subsequente purificação. As iPSCs foram diferenciadas como uma monocamada em condições quimicamente definidas por modelação temporal da via de sinalização WNT canónica. A diferenciação cardíaca de iPSCs humanas gerou em média 50% de cardiomiócitos cTnT+, com um rendimento médio de 3,1 cardiomiócitos/iPSC. Os marcadores de pluripotência diminuíram gradualmente com o tempo, enquanto que os marcadores cardíacos aumentaram gradualmente; o marcador de mesendoderme T/Brachyury aumentou até atingir um pico ao dia 3 e os marcadores de CVPCs c-KIT e SSEA-1 aos dias 5 e 12, respetivamente, diminuindo de seguida. CVPCs ao dia 7 de diferenciação foram purificadas recorrendo à separação celular ativada por magnetismo (MACS) e ao método do lactato. A seleção imunomagnética negativa utilizando o marcador TRA-1-60 resultou numa eficiência de 68%, e a seleção positiva usando o marcador SSEA-1 resultou em 11%. As células purificadas não se reorganizaram em colónias teciduais ou agregados como as células não purificadas. O método do lactato gerou acima de 95% de células cTnT+ viáveis. O protocolo de MACS comprometeu a viabilidade celular, mas com a devida otimização, tem o potencial de gerar CVPCs de qualidade clínica para aplicações biomédicas.
setembro 21, 2016, 11:0
Publicação
Obra sujeita a Direitos de Autor
Orientação
ORIENTADOR
Maria Margarida Fonseca Rodrigues Diogo
Departamento de Bioengenharia (DBE)
Professor Auxiliar
ORIENTADOR
Tiago Paulo Gonçalves Pinheiro Fernandes
Departamento de Bioengenharia (DBE)
Colaborador Não Remunerado Docente