Dissertação

Derivation, characterization and purification of multipotent cardiovascular progenitor cells derived from human induced pluripotent stem cells EVALUATED

As células estaminais pluripotentes induzidas (iPSCs) podem diferenciar-se em todos os tipos de células no corpo humano, incluindo todos os tipos de células cardíacas. Contudo, terapias envolvendo derivados de iPSCs estão limitadas pelo potencial tumorigénico destas, que precisam de ser removidas antes do uso clínico. Este trabalho pretendeu produzir células progenitoras cardiovasculares (CVPCs) altamente puras a partir de iPSCs humanas por diferenciação e subsequente purificação. As iPSCs foram diferenciadas como uma monocamada em condições quimicamente definidas por modelação temporal da via de sinalização WNT canónica. A diferenciação cardíaca de iPSCs humanas gerou em média 50% de cardiomiócitos cTnT+, com um rendimento médio de 3,1 cardiomiócitos/iPSC. Os marcadores de pluripotência diminuíram gradualmente com o tempo, enquanto que os marcadores cardíacos aumentaram gradualmente; o marcador de mesendoderme T/Brachyury aumentou até atingir um pico ao dia 3 e os marcadores de CVPCs c-KIT e SSEA-1 aos dias 5 e 12, respetivamente, diminuindo de seguida. CVPCs ao dia 7 de diferenciação foram purificadas recorrendo à separação celular ativada por magnetismo (MACS) e ao método do lactato. A seleção imunomagnética negativa utilizando o marcador TRA-1-60 resultou numa eficiência de 68%, e a seleção positiva usando o marcador SSEA-1 resultou em 11%. As células purificadas não se reorganizaram em colónias teciduais ou agregados como as células não purificadas. O método do lactato gerou acima de 95% de células cTnT+ viáveis. O protocolo de MACS comprometeu a viabilidade celular, mas com a devida otimização, tem o potencial de gerar CVPCs de qualidade clínica para aplicações biomédicas.
célula estaminal pluripotente induzida, célula progenitora cardiovascular, diferenciação cardíaca, via de sinalização WNT canónica, separação celular ativada por magnetismo

Setembro 21, 2016, 11:0

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

ORIENTADOR

Maria Margarida Fonseca Rodrigues Diogo

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Professor Auxiliar

ORIENTADOR

Tiago Paulo Gonçalves Fernandes

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Colaborador Não Remunerado Docente