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Dissertação

Development of a non-invasive method for the in vitro monitoring of 3D cell cultures EVALUATED

Detalhes: As células estromais mesenquimais (MSC) têm um potencial de utilização na medicina regenerativa devido a propriedades notáveis, como as capacidades imunomodulatória e de multi-diferenciação. As MSC são isoladas a partir de tecidos e expandidas in vitro de modo a se alcançarem quantidades relevantes para terapias celulares, podendo ser posteriormente cultivadas em plataformas tridimensionais (3D) e diferenciadas para fins de engenharia de tecidos. Atualmente, as metodologias para examinar culturas 3D são baseadas em análises “endpoint”, que sacrificam as amostras celulares e aumentam o risco de contaminação devido ao manuseamento regular. Neste trabalho, foi utilizado um mini-reator de perfusão com o objetivo de cultivar dinamicamente, em plataformas 3D, MSC provenientes do tecido adiposo (adMSC). Para tal, foi inserido um catéter dentro das plataformas para se obterem amostras de forma não invasiva, permitindo a monitorização da cultura via análise de parâmetros biológicos e prevenindo o uso de metodologias “endpoint”. Previamente à cultura no reator, avaliou-se a sua citotoxicidade, e otimizou-se o método de cultura nas plataformas 3D. Adicionalmente, caracterizou-se a capacidade difusional e a diferenciação de adMSC nessas plataformas. Através de “calcein-AM/PI staining”, demonstrou-se que as células permaneceram viáveis por até 7 dias de cultura sob perfusão. A monitorização de glucose/lactato nas plataformas foi possível devido à obtenção de amostras através do catéter, permitindo prever de forma não invasiva o comportamento celular durante a cultura. Estes resultados suportam o potencial desta nova configuração de acoplamento de um catéter ao reator, com vista à criação de um sistema otimizado de monitorização de culturas 3D.
Keywords: Células estromais mesenquimais (MSC), Medicina regenerativa, Bioreactor de perfusão, Cultura dinâmica, Cultura celular tri-dimensional (3D), Monitorização de culturas celulares 3D

Discussão: novembro 19, 2019, 14:30