Dissertação

Produção de uma enzima recombinada a partir de células CHO: Estudos cinéticos e metabólicos em condições de hipotermia moderada em sistemas agitados EVALUATED

A glucocerebrosidase recombinada (GBA) pertence ao grupo de fármacos chamados de Orphan Drugs (OD) usados no tratamento de doenças raras. A GBA é utilizada na Terapia de Reposição de Enzimática (TRE) para o tratamento da Doença de Gaucher (DG). Devido aos altos custos dos OD's, os tratamentos das doenças raras são dispendiosos para o sistema nacional de saúde. Neste contexto, o processo de perfusão para a produção GBA a partir de células de ovário de hamster chinês (CHO) foi desenvolvido. Estudou-se duas linhagens celulares, CHO.PRO-5.65p e CHO.K1.36k, nas condições de hipotermia moderada combinada com a suplementação de ácido valérico de modo avaliar a condição e a linhagem em que a produção de GBA fosse máxima. Os melhores resultados foram obtidos para as células CHO.PRO-5.65p, em que se obteve o valor de qP mais elevado a 31°C, sem suplementação de ácido valérico e a 31°C com 2mM de ácido valérico para 36K. Comparando com os controlos (37°C sem ácido valérico), a diferença foi de 4.1x para 65p e 7.3x para 36k. Foi realizado um cultivo num biorreactor de tanque agitado em perfusão utilizando as células 65p. Após a fase de crescimento a 37°C, fez-se um shift de temperatura para 31°C. A atividade máxima em perfusão foi de 9,5x mais elevada em comparação modo batch a 31°C e 22x mais elevada relativamente ao controlo em batch. Neste trabalho, a modificação das condições de cultura foi implementada com sucesso em perfusão bifásica aumentando o rendimento da produtividade do processo.
Glucocerebrosidase, células de ovário de hamster chinês, perfusão bifásica, hipotermia moderada, ácido valérico, produtividade do processo

Novembro 23, 2016, 17:0

Publicação

Obra sujeita a Direitos de Autor

Orientação

ORIENTADOR

Juliana Coronel de Lima Lages

Universidade Federal do Rio de Janeiro

Doutora

ORIENTADOR

Ana Margarida Nunes da Mata Pires de Azevedo

Departamento de Bioengenharia (DBE)

Prof Auxiliar Convidado